Ga naar de inhoud
MRC-5
Weefsel
Long
Synoniemen
MRC5, MRC 5, MRCV, MRC-V, Medical Research Council cell strain-5

Documenten

MRC-5

Cell line · Productnummer 300395

MRC-5 cells, a human lung fibroblast cell line derived from the lung tissue of a 14-week-old male fetus in 1966, are extensively utilized in the productio...

€430.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving

MRC-5 cellen, een menselijke longfibroblast cellijn afkomstig van het longweefsel van een 14 weken oude mannelijke foetus in 1966, worden op grote schaal gebruikt bij de productie van bepaalde vaccins, waaronder die voor hepatitis A, polio, hondsdolheid en meer.

De gevoeligheid voor verschillende menselijke virussen, met name humaan poliovirus 1, herpes simplex virus en vesiculair stomatitis virus, onderstreept de rol van MRC5-cellen bij de ontdekking van antivirale middelen, virale vaccins, vaccinveiligheid en virusreplicatie. MRC-5- en WI-38-cellijnen worden vandaag de dag nog steeds gebruikt voor de productie van vaccins tegen varicella, rubella, hepatitis A en een versie van het rabiësvaccin. Onlangs werden MRC-5 cellen gemodificeerd om de ACE2 receptor tot expressie te brengen, en deze cellen hebben een sleutelrol gespeeld in het SARS onderzoek. De gemodificeerde MRC5 menselijke ace2 cellen stellen wetenschappers in staat om te bestuderen hoe het SARS-CoV virus gastheercellen binnendringt en zich vermeerdert. Dit werk is van vitaal belang geweest voor het begrijpen van het gedrag van het virus en het ontwikkelen van gerichte antivirale middelen en behandelingen.

Het nut van de MRC5 foetale cellijn reikt verder dan de productie van vaccins en omvat ook potentiële rollen in kankeronderzoek, waarbij de cellijn wordt gebruikt in onderzoeken naar de tumormicro-omgeving en interacties tussen kankercellen, vanwege hun vermogen om te differentiëren in meerdere celtypen, waaronder osteocyten en chondrocyten. Dit heeft geleid tot speculaties over hun gelijkenis met mesenchymale stamcellen (MSCs), gezien hun fibroblast-achtige morfologie en behoud van een normaal diploïd karyotype na uitgebreide in vitro expansie.

Weefsel
Long
Toepassingen
Productie van vaccins
Synoniemen
  • MRC5
  • MRC 5
  • MRCV
  • MRC-V
  • Medical Research Council cell strain-5

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Man
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Celtype
Fibroblast
Karyotype
MRC5 is een diploïde cellijn met een modaal chromosoomnummer van 46.

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
MRC-5 (Cytion catalogusnummer 300395)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_0440

05Expressie en vatbaarheid

Gevoeligheid voor virussen
Niet gevoelig voor infectie met het SARS-coronavirus 2 (SARS-CoV-2) (COVID-19)

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamine, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion artikelnummer 820100a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS en 1% NEAA
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
Foetus