Mine otse sisu juurde
MRC-5
Kude
Kopsud
Sünonüümid
MRC5, MRC 5, MRCV, MRC-V, Medical Research Council cell strain-5

Dokumendid

MRC-5

Cell line · Toote number 300395

MRC-5 cells, a human lung fibroblast cell line derived from the lung tissue of a 14-week-old male fetus in 1966, are extensively utilized in the productio...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

MRC-5 rakke, inimese kopsufibroblastide rakuliini, mis on saadud 1966. aastal 14-nädalase meessoost loote kopsukoes, kasutatakse laialdaselt teatavate vaktsiinide, sealhulgas A-hepatiidi, lastehalvatuse, marutaudi ja muude vaktsiinide tootmisel.

Tundlikkus erinevate inimviiruste, eelkõige inimese polioviiruse 1, herpes simplex'i viiruse ja vesikulaarse stomatiidi viiruse suhtes rõhutab MRC5 rakkude rolli viirusevastaste ravimite, viirusvaktsiinide, vaktsiinide ohutuse ja viiruste replikatsiooni avastamisel. MRC-5 ja WI-38 rakuliine kasutatakse tänapäevalgi veel varicella, punetiste, A-hepatiidi ja marutaudi vaktsiini ühe versiooni valmistamiseks. Hiljuti muudeti MRC-5 rakke nii, et need ekspresseeriksid ACE2 retseptorit, ja need on olnud SARSi uurimisel võtmetähtsusega. Muudetud MRC5 inimese ace2 rakud võimaldavad teadlastel uurida, kuidas SARS-CoV viirus siseneb ja paljuneb peremehe rakkudes. See töö on olnud oluline viiruse käitumise mõistmiseks ning sihipäraste viirusevastaste ainete ja ravimeetodite väljatöötamiseks.

MRC5 loote rakuliini kasulikkus ulatub kaugemale vaktsiinide tootmisest ja hõlmab ka võimalikku rolli vähiuuringutes, kusjuures rakuliini kasutatakse uuringutes, kus uuritakse kasvajate mikrokeskkonda ja vähirakkude vastastikmõju, tänu nende võimele diferentseeruda mitmeks rakutüübiks, sealhulgas osteotsüütideks ja kondrotsüütideks. See on põhjustanud spekulatsioone nende sarnasuse kohta mesenhümaatiliste tüvirakkudega (MSC), arvestades nende fibroblastilaadset morfoloogiat ja normaalse diploidse karüotüübi säilitamist ulatusliku in vitro ekspansiooni käigus.

Kude
Kopsud
Rakendused
Vaktsiini tootmine
Sünonüümid
  • MRC5
  • MRC 5
  • MRCV
  • MRC-V
  • Medical Research Council cell strain-5

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Rakutüüp
Fibroblastide
Karyotüüp
MRC5 on diploidne rakuliin, mille modaalne kromosoomiarv on 46.

04Tunnused

Viide
MRC-5 (Cytioni katalooginumber 300395)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_0440

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Viirusele vastuvõtlikkus
Ei ole vastuvõtlik SARS-koronaviiruse 2 (SARS-CoV-2) nakkusele (COVID-19)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
Loote