Przejdź do treści

Media i odczynniki

40 produkty

Insulin, Human recombinant, Solution (5 mg/ml)

Volume: 5 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered Insulin Human Recombinant Solution is a chemically defined supplement commonly used for the cultivation of mammalian cell lines, including Chinese Hamster Ovary (CHO) cells. This cell culture–grade solution contains recombinant human insulin expressed in Saccharomyces cerevisiae, ensuring high purity and consistent performance in research applications. Application and Benefits Insulin is routinely added to serum-free and chemically defined media to promote cell growth and productivity. As a key regulatory hormone, insulin supports cellular uptake, utilization, and storage of glucose, amino acids, and fatty acids. It also inhibits the breakdown of glycogen, proteins, and lipids, thereby contributing to improved cell viability and metabolic stability in culture systems. The chemically defined formulation supports reproducibility and minimizes variability in sensitive cell culture workflows. Biological Properties and Usage Insulin is a two-chain polypeptide hormone naturally produced by the β-cells of the pancreatic islets. It has a molecular weight of approximately 5,800 Da. The α- and β-chains are linked by two interchain disulfide bonds, and the α-chain contains one intrachain disulfide bond. For cell culture applications, the solution should be handled under aseptic conditions and stored at +2°C to +8°C to maintain stability and performance. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€109.00

bez podatku i kosztów wysyłki

Insulin-Transferrin-Selenium (ITS), Solution 100x

Volume: 10 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) Solution (100x) is a chemically defined supplement designed for a wide range of cell culture applications. It is most commonly used as an additive to basal cell culture media to support cell growth under reduced-serum or serum-free conditions. Application and Benefits Our ITS supplement provides essential components required for the optimal performance of serum-free media. By supplementing conventional nutrient media with ITS, the fetal bovine serum (FBS) requirement for the routine maintenance of many cell lines can be significantly reduced. This helps minimize variability associated with serum use while maintaining consistent cell growth and viability. Insulin supports cellular uptake and metabolism of key nutrients, transferrin facilitates iron transport, and selenium contributes to antioxidant defense and enzymatic activity. Together, these components promote balanced cell metabolism and improved reproducibility in defined culture systems. Formulation and Usage Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) is supplied as a 100x concentrated solution in Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) without phenol red. For standard applications, dilute 1:100 into the appropriate basal medium to achieve the recommended working concentration. Store at +2°C to +8°C and handle under aseptic conditions to maintain product stability and sterility. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€59.00

bez podatku i kosztów wysyłki

Pożywka McCoys 5A średnia (zmodyfikowana), w: 3,0 g/l glukozy, w: stabilna glutamina, w: 2,0 mM pirogronianu sodu, w: 2,2 g/l NaHCO₃

Pożywka McCoy's 5A to wysoce zalecana, specjalistyczna pożywka przeznaczona do wspomagania wzrostu i replikacji wirusów w pierwotnych hodowlach komórkowych. Zyskała ona szerokie uznanie dzięki wyjątkowej skuteczności w różnych zastosowaniach badań biologicznych. Jednym z najważniejszych zastosowań pożywki McCoy's 5A jest jej wykorzystanie w hodowli ludzkich linii komórkowych raka jelita grubego. W szczególności została ona wykorzystana w badaniach nad receptorem sprzężonym z białkiem G zawierającym powtórzenia bogate w leucynę (LGR5) oraz jego rolą w przerzutach raka jelita grubego. Pożywka ta została skutecznie wykorzystana do hodowli kilku linii komórkowych raka jelita grubego, w tym HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b i TENN, umożliwiając badaczom głębsze zgłębienie mechanizmów leżących u podstaw przerzutów raka jelita grubego. Oprócz zastosowania w badaniach nad rakiem, pożywka McCoy's 5A okazała się niezbędna w badaniach nad osteoblastami. Naukowcy badający reaktywność jonową hydroksyapatytu z niedoborem wapnia w standardowych pożywkach do hodowli komórkowej wykorzystali tę pożywkę do hodowli osteoblastów. Zastosowanie to ułatwiło lepsze zrozumienie interakcji między osteoblastami a hydroksyapatytem z niedoborem wapnia, przyczyniając się do postępów w dziedzinie badań nad kością. Pożywka McCoy’s 5A została skrupulatnie opracowana poprzez modyfikację aminokwasów występujących w pożywce Basal Medium Eagle w celu zapewnienia optymalnego wsparcia dla komórek nowotworowych wątroby. Ta wzbogacona formuła sprawia, że nadaje się ona do stosowania z szeroką gamą uznanych linii komórkowych, a także komórek pierwotnych, co dodatkowo zwiększa jej wszechstronność i przydatność w różnych warunkach badawczych. Pożywka McCoy's 5A wykazuje działanie biochemiczne i fizjologiczne wykraczające poza komórki nowotworowe wątroby. Z powodzeniem stosowano ją do wspierania wzrostu w pierwotnych hodowlach komórek szpiku kostnego, skóry, dziąseł, nerek, sieci, nadnerczy, płuc, śledziony, embrionów szczurów oraz innych typów komórek. Ten szeroki zakres zastosowań świadczy o wszechstronności pożywki McCoy’s 5A w wspieraniu wzrostu i utrzymaniu różnych typów komórek na potrzeby kompleksowych badań biologicznych. Skład Pochodna pożywki McCoy's 5A (zmodyfikowana) zawiera 3,0 g/l glukozy, stabilną glutaminę, 2,0 mM pirogronianu sodu oraz 2,2 g/l NaHCO3. Kontrola jakości • pH = 7,2 ± 0,02 w temperaturze 20–25°C. • Każda partia została przebadana pod kątem sterylności oraz braku mykoplazm i bakterii. Przechowywanie • Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C, w ciemności. Zamrażanie i podgrzewanie do temperatury +37°C obniżają jakość produktu. • Nie należy podgrzewać pożywki do temperatury wyższej niż 37°C ani używać niekontrolowanych źródeł ciepła (np. kuchenek mikrofalowych). • Jeśli ma zostać wykorzystana tylko część pożywki, należy pobrać tę ilość z butelki i ogrzać ją do temperatury pokojowej. • Okres przydatności do użycia wszystkich pożywek, z wyjątkiem pożywki podstawowej, wynosi od 6 do 8 tygodni od daty otwarcia. Skład Składniki mg/l Sole nieorganiczneChlorek wapnia x 2H₂O132,00 Siarczan magnezu97,67 Chlorek potasu400,00 Chlorek sodu6 460,00 Wodorofosforan disodowy (bezwodny)504,00 Pozostałe składnikiD(+)-glukoza (bezwodna)3 000,00 Glutation (zredukowany)0,50 Pepton mięsny600,00 Sól sodowa czerwieni fenolowej11,00 AminokwasyL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-asparagina x H₂O45,03 Kwas L-asparaginowy19,97 L-cysteina × HCl × H₂O31,75 L-glutamina (stabilna)219,15 Kwas L-glutaminowy22,07 Glicyna7,51 L-histydyna x HCl x H₂O20,96 L-hydroksyprolina19,67 L-izoleucyna39,36 L-leucyna39,36 L-lizyna x HCl36,54 L-metionina14,92 L-fenyloalanina16,52 L-prolina17,27 L-seryna26,28 L-treonina17,87 L-tryptofan3,06 Sól disodowa L-tyrozyny26,10 L-walina17,57 WitaminyKwas p-aminobenzoesowy1,00 Kwas askorbinowy0,56 D(+)-biotyna0,20 D-pantotenian wapnia0,20 Chlorek choliny5,00 Kwas foliowy10,00 mio-inozytol36,00 Nikotynamid0,50 Kwas nikotynowy0,50 Chlorowodorek pirydoksalu0,50 Chlorowodorek pirydoksyny0,50 Ryboflawina0,20 Chlorowodorek tiaminy0,20 Witamina B122,00

€30.00

bez podatku i kosztów wysyłki

Pożywka 199, zawierająca: 2,7 mM stabilnej glutaminy, 2,2 g/l NaHCO₃, oraz EBSS

Medium 199 to wszechstronna i powszechnie stosowana pożywka do hodowli komórkowej, opracowana specjalnie z myślą o hodowli eksplantatów pierwotnych. Ta kompleksowa pożywka łączy w sobie niezbędne witaminy, aminokwasy i inne czynniki, zapewniając w pełni zdefiniowane źródło składników odżywczych dla różnorodnych typów komórek. Nadaje się ona szczególnie do komórek nietransformowanych, co czyni ją nieocenionym narzędziem w badaniach biologicznych. Pożywka 199 ma szeroki zakres zastosowań w tej dziedzinie. Pozwala skutecznie utrzymywać kompleks cumulus-oocyt (COC) oraz wspomaga dojrzewanie oocytów in vitro. Ponadto jest ono stosowane do płukania przewodów aspiracyjnych podczas pobierania komórek jajowych od krów rasy niemieckiej holenderskiej. Co więcej, Medium 199 stanowi doskonałą pożywkę do hodowli komórek śródbłonka sercowego pochodzących od szczurów. Zastosowania te świadczą o wszechstronności i zdolności dostosowania się Medium 199 do różnych potrzeb eksperymentalnych. Historia Opracowanie pożywki 199 w latach 50. XX wieku stanowiło znaczący postęp w dziedzinie pożywek do hodowli tkankowej. Przed jej wprowadzeniem wiele pożywek opierało się na produktach pochodzenia zwierzęcego i ekstraktach tkankowych. Jednak Morgan i współpracownicy zrewolucjonizowali tę dziedzinę, opracowując całkowicie zdefiniowane źródło składników odżywczych dla hodowli komórkowych. Dzięki eksperymentom z różnymi kombinacjami witamin, aminokwasów i innych czynników odkryli oni wyjątkowe właściwości pożywki 199 sprzyjające wzrostowi komórek. Kontrola jakości • pH = 7,2 ± 0,02 w temperaturze 20–25°C. • Każda partia została przebadana pod kątem sterylności oraz braku mykoplazm i bakterii. Przechowywanie • Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C, w ciemności. Zamrażanie i podgrzewanie do temperatury powyżej +37°C obniżają jakość produktu. • Nie należy podgrzewać pożywki do temperatury wyższej niż 37°C ani używać niekontrolowanych źródeł ciepła (np. kuchenek mikrofalowych). • Jeśli ma zostać wykorzystana tylko część pożywki, należy pobrać tę ilość z butelki i ogrzać ją do temperatury pokojowej. • Okres przydatności wszystkich pożywek, z wyjątkiem pożywki podstawowej, wynosi 8 tygodni od daty produkcji. Skład Składniki mg/l Sole nieorganiczne Chlorek wapnia x 2H₂O 264,92 Azotan żelaza (III) x 9H₂O 0,72 Siarczan magnezu 97,67 Chlorek potasu 400,00 Octan sodu x 3H₂O 82,95 Chlorek sodu 6 800,00 Dihydrofosforan sodu x H₂O 140,00 Pozostałe składniki Siarczan adeniny 10,00 AMP 0,20 ATP 1,00 Cholesterol 0,20 2'-deoksyryboza 0,50 D(+)-glukoza bezwodna 1 000,00 Glutation (czerwony) 0,05 Guanina x HCl 0,30 Hipotoksantyna 0,30 Czerwień fenolowa 10,00 D-ryboza 0,50 Tymina 0,30 Tween 80 4,90 Uracyl 0,30 ksantyna 0,30 NaHCO₃ 2 200,00 Aminokwasy L-alanina 25,00 L-arginina x HCl 70,00 Kwas L-asparaginowy 30,00 L-cysteina x HCl x H₂O 0,10 L-cystyna 20,00 L-glutamina stabilna 149,00 Kwas L-glutaminowy 67,00 Glicyna 50,00 L-histydyna x HCl x H₂O 21,88 L-hydroksyprolina 10,00 L-izoleucyna 20,00 L-leucyna 60,00 L-lizyna x HCl 70,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 30,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 40,00 L-walina 25,00 Witaminy Kwas 4-aminobenzoesowy 0,05 Kwas askorbinowy 0,05 D(+)-biotyna 0,01 Kalcyferol 0,10 D-pantotenian wapnia 0,01 Chlorek choliny 0,50 Kwas foliowy 0,01 mio-inozytol 0,05 Menadion 0,01 Kwas nikotynowy 0,025 Nikotynamid 0,025 Pirydoksal x HCl 0,025 pirydoksol x HCl 0,025 Ryboflawina 0,01 Sól disodowa fosforanu DL-α-tokoferolu 0,01 Tiamina x HCl 0,01 Octan witaminy A 0,14

€40.00

bez podatku i kosztów wysyłki

Pożywka do hodowli komórek NCI-H295R

Odkryj zaawansowaną pożywkę do hodowli komórek NCI-H295R – profesjonalnie opracowany roztwór odżywczy, stworzony specjalnie w celu wspierania wzrostu i utrzymania linii komórek ssaków, w tym wyspecjalizowanych komórek NCI-H295R. Pożywka ta wyróżnia się unikalną mieszanką pożywki Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) i Ham's F-12 (Nutrient Mixture F-12) w precyzyjnym stosunku 1:1, wzbogaconą o niezbędne suplementy, aby zaspokoić złożone potrzeby hodowli komórkowej. Ulepszona formuła zapewniająca doskonałe wyniki hodowli komórkowej • Wzbogacona podstawa: Podstawowa pożywka jest już bogata, łącząc wysokie stężenia aminokwasów i witamin z pożywki DMEM z różnorodnymi składnikami odżywczymi pożywki Ham’s F-12. Do tej silnie działającej mieszanki dodaliśmy 5% surowicy płodowej bydlęcej (FBS), dostarczającej kluczowych czynników wzrostu, hormonów i białek. • Dopasowane dodatki: Oprócz FBS pożywka ta została wzbogacona o kluczowe suplementy, w tym insulinę, transferynę, albuminę surowicy bydlęcej, kwas selenowy i kwas linolenowy. Dodatki te zaspokajają specyficzne potrzeby komórek, wspomagając ich wzrost, funkcje metaboliczne i ogólny stan zdrowia. • Wzmocnienie L-glutaminą: Obecność L-glutaminy dodatkowo zwiększa skuteczność pożywki, wspierając niezbędne procesy metaboliczne i sprzyjając intensywnej proliferacji komórek. Zoptymalizowane pod kątem hodowli komórkowej • Środowisko o kontrolowanym pH: Dzięki zastosowaniu systemu buforowego na bazie wodorowęglanu oraz wskaźnika czerwonego fenolu pożywka zapewnia stabilne środowisko pH. Jest ona zoptymalizowana do atmosfery zawierającej 5% CO₂, co pozwala na precyzyjne monitorowanie i regulację pH. • Jakość i czystość: Każda partia pożywki podstawowej przechodzi rygorystyczne testy na sterylność, obecność mykoplazm i bakterii, co gwarantuje jej integralność. Dzięki utrzymywanemu na stałym poziomie pH możesz mieć pewność co do stałej jakości i wydajności tej pożywki. Postępowanie i przechowywanie Aby zachować jakość pożywki, należy ją przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C, z dala od światła. Należy unikać ekstremalnych warunków, takich jak zamarzanie lub przegrzanie, aby zachować jej skuteczność. W przypadku częściowego zużycia należy delikatnie ogrzać potrzebną ilość do temperatury pokojowej, upewniając się, że pożywka osiągnęła odpowiedni stan bez uszczerbku dla jej składników. Okres przydatności Dzięki 8-tygodniowemu okresowi przydatności do użycia od daty produkcji pożywka do hodowli komórek NCI-H295R stanowi niezawodny wybór dla Twoich potrzeb w zakresie hodowli komórkowej, zapewniając żywotność i wydajność Twoich badań.

€150.00

bez podatku i kosztów wysyłki

PBS

Roztwór soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) jest powszechnie stosowanym roztworem buforowym w badaniach biologicznych i chemicznych. Odgrywa on kluczową rolę w utrzymaniu równowagi pH i osmolarności podczas różnych procedur eksperymentalnych, w tym podczas przetwarzania tkanek i hodowli komórkowej. Nasz roztwór PBS został starannie opracowany z wykorzystaniem składników o wysokiej czystości, aby zapewnić stabilność i niezawodność w każdym eksperymencie. Osmolarność i stężenia jonów w naszym roztworze PBS ściśle odpowiadają wartościom występującym w organizmie człowieka, dzięki czemu jest on izotoniczny i nietoksyczny dla większości komórek. Skład naszego roztworu PBS Nasz roztwór PBS to mieszanina buforów fosforanowych klasy ultraczystej i roztworów soli fizjologicznej o dostosowanym pH. W stężeniu roboczym 1X zawiera: • 8000 mg/l chlorku sodu (NaCl) • 200 mg/l chlorku potasu (KCl) • 1150 mg/l bezwodnego fosforanu sodu dwuzasadowego (Na₂HPO₄) • 200 mg/l bezwodnego fosforanu potasu jednowodorowego (KH₂PO₄) Skład ten zapewnia optymalne pH i równowagę jonową, odpowiednią do szerokiego zakresu zastosowań biologicznych. Zastosowania naszego roztworu PBS Nasz roztwór PBS idealnie nadaje się do różnych zastosowań w badaniach biologicznych. Dzięki swoim właściwościom izotonicznym i nietoksycznym nadaje się do rozcieńczania substancji oraz płukania naczyń z komórkami. Roztwory PBS zawierające EDTA skutecznie oddzielają przylegające i zbite komórki. Nie należy jednak dodawać do PBS metali dwuwartościowych, takich jak cynk, ponieważ może to spowodować wytrącanie się osadu. W takich przypadkach zaleca się stosowanie buforów Gooda. Ponadto nasz roztwór PBS stanowi akceptowalną alternatywę dla pożywki transportowej wirusów do transportu i przechowywania wirusów RNA, w tym SARS-CoV-2. Kontrola jakości • Filtrowany sterylnie Przechowywanie i okres przydatności • Przechowywać w temperaturze od +2°C do +25°C, w miejscu chronionym przed światłem. • Po otwarciu przechowywać w temperaturze od 2°C do 25°C i zużyć w ciągu 24 miesięcy. Warunki transportu • Temperatura otoczenia Konserwacja • Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Należy unikać zamrażania i częstego podgrzewania do +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu. • Nie podgrzewać pożywki powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak kuchenki mikrofalowe. • Jeśli ma zostać wykorzystana tylko część pożywki, należy pobrać wymaganą ilość i przed użyciem ogrzać ją do temperatury pokojowej. Skład Kategoria Składniki Stężenie (mg/l) Sole Chlorek potasu 200 Bezwodny fosforan potasu jednowodorotlenowy 200 Chlorek sodu 8000 Bezwodny fosforan sodu dwuzasadowy 1150

€20.00

bez podatku i kosztów wysyłki

RPMI 1640, zawierający 2,0 mM stabilnej glutaminy oraz 2,0 g/l NaHCO₃

Pożywka RPMI 1640, znana również jako pożywka RPMI, to niezwykle wszechstronna pożywka do hodowli komórek, szeroko stosowana w badaniach biologicznych do hodowli różnych komórek ssaków. Opracowane w 1966 roku przez George'a E. Moore'a, Roberta E. Gernera i H. Addisona Franklina w renomowanym Roswell Park Comprehensive Cancer Center, pochodzi swoją nazwę od miejsca powstania – Roswell Park Memorial Institute (RPMI). Początkowo zaprojektowane w celu wspierania wzrostu ludzkich komórek białaczkowych zarówno w hodowlach zawiesinowych, jak i jednowarstwowych, po modyfikacjach wprowadzonych przez naukowców i dostawców komercyjnych pożywka RPMI 1640 stała się odpowiednia dla szerokiej gamy komórek ssaków. Charakteryzuje się wyjątkową kompatybilnością z takimi liniami komórkowymi, jak HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyty oraz nowotwory złośliwe. Pożywka RPMI 1640 wyróżnia się na tle innych pożywek do hodowli komórkowej dzięki swojemu unikalnemu składowi. Zawiera znaczną ilość fosforanów, aminokwasów i witamin. Co istotne, zawiera biotynę, witaminę B12 i PABA, których brakuje w minimalnej pożywce niezbędnej Eagle’a (Eagle’s Minimal Essential Medium) lub zmodyfikowanej pożywce Dulbecco’a (Dulbecco’s Modified Eagle Medium). Ponadto pożywka RPMI 1640 charakteryzuje się znacznie podwyższonym stężeniem witamin: inozytolu i choliny. Nie zawiera jednak białek, lipidów ani czynników wzrostu. W związku z tym często konieczne jest uzupełnienie jej 10% surowicą płodową bydlęcą (FBS), aby zapewnić optymalne warunki wzrostu komórek. System buforujący pożywki RPMI 1640 opiera się na wodorowęglanie sodu i wymaga środowiska o stężeniu CO₂ wynoszącym 5–10%, aby utrzymać fizjologicznie odpowiednie pH. Dodatek środka redukującego – glutationu – dodatkowo odróżnia tę pożywkę od innych. Kontrola jakości • Filtrowane sterylnie Przechowywanie i okres przydatności • Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C, w miejscu chronionym przed światłem. • Po otwarciu przechowywać w temperaturze 4°C i zużyć w ciągu 6–8 tygodni. Warunki transportu • Temperatura otoczenia Przechowywanie • Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C, w ciemności. Należy unikać zamrażania i częstego podgrzewania do +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu. • Nie podgrzewać pożywki powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak kuchenki mikrofalowe. • Jeśli ma zostać wykorzystana tylko część pożywki, należy pobrać wymaganą ilość i przed użyciem ogrzać ją do temperatury pokojowej. Skład Kategoria Składniki Stężenie (mg/l) Aminokwasy Glicyna 10,00 L-alanylo-L-glutamina 434,40 L-arginina 200,00 L-asparaginaH₂O 56,82 Kwas L-asparaginowy 20,00 L-cystyna 2HCl 65,20 Kwas L-glutaminowy 20,00 L-histydyna HClH₂O 20,27 L-hydroksy-L-prolina 20,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 50,00 L-lizyna HCl 40,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 15,00 L-prolina 20,00 L-seryna 30,00 L-treonina 20,00 L-tryptofan 5,00 L-tyrozyna 2Na2H₂O 28,83 L-walina 20,00 Witaminy Kwas p-aminobenzoesowy 1,00 D-biotyna 0,20 Chlorek choliny 3,00 Pantotenian wapnia D 0,25 Kwas foliowy 1,00 mio-inozytol 35,00 Nikotynamid 1,00 Chlorowodorek pirydoksyny 1,00 Ryboflawina 0,20 Chlorowodorek tiaminy 1,00 WitaminaB12 0,005 Sole nieorganiczne Ca(NO₃)₂4H₂O 100,00 KCl 400,00 MgSO₄·7H₂O 100,00 NaCl 6000,00 NaHCO₃ 2000,00 Na₂HPO₄ 800,00 Inne składniki D-glukoza 2000,00 L-glutation zredukowany 1,00 Sól sodowa czerwieni fenolowej 5,30

€25.00

bez podatku i kosztów wysyłki

Stable Glutamin (200mM), L-Alanyl-L-Glutamine Solution

Volume: 100 ml Storage: ≤ –15°C Sterility: Sterile-filtered Stable Glutamine Solution (L-Alanyl-L-Glutamine, 200 mM) is a highly stable dipeptide form of L-glutamine designed as a direct replacement for conventional L-glutamine in cell culture media. L-glutamine is an essential amino acid and a major energy source for cultured cells, playing a critical role in cell growth, metabolism, and protein synthesis. Application and Benefits In standard liquid media, L-glutamine degrades relatively quickly at 37°C, leading to the formation of toxic byproducts such as ammonium ions that can negatively affect cell viability and experimental outcomes. Stable glutamine overcomes this limitation by providing a non-degrading dipeptide form that remains intact in culture conditions. Cells enzymatically cleave the dipeptide bond to release L-glutamine as needed, ensuring a continuous fresh supply while preventing the accumulation of harmful waste products. This makes the solution particularly advantageous for long-term cell cultures and high-density growth systems. Formulation and Usage The L-Alanyl-L-Glutamine solution is prepared in cell culture–grade water at a concentration of 200 mM and is sterile-filtered for contamination-sensitive applications. It can be diluted directly into complete media according to experimental requirements. Store at ≤ –15°C and avoid repeated freeze-thaw cycles to maintain product stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€52.00

bez podatku i kosztów wysyłki

Pożywki do hodowli komórkowej: przegląd

W dziedzinie nauk przyrodniczych jedną z najważniejszych metod jest hodowla komórkowa. Termin „hodowla komórkowa” oznacza pobranie komórek, tkanek lub narządów od zwierzęcia lub rośliny, a następnie umieszczenie ich w sztucznym środowisku sprzyjającym ich przeżyciu i/lub wzrostowi. Podstawowe wymagania środowiskowe niezbędne do optymalnego rozwoju komórek to kontrolowana temperatura, podłoże umożliwiające przyleganie komórek, odpowiednia pożywka oraz inkubator utrzymujący optymalne pH i osmolalność. Komórki muszą mieć zapewnione te warunki, aby mogły w pełni rozwinąć swój potencjał.

Wybór odpowiedniej pożywki wzrostowej do hodowli in vitro jest etapem hodowli komórkowej, który jest zarówno najbardziej krytyczny, jak i najważniejszy. Pożywka wzrostowa, znana również jako pożywka hodowlana, to płyn lub żel opracowany w celu stymulowania rozwoju organizmów w skali mikroskopowej, komórkowej lub roślinnej. Pożywka stosowana do hodowli komórek często zawiera odpowiednią ilość energii oraz substancji regulujących cykl komórkowy. Głównymi składnikami pożywki hodowlanej są aminokwasy, witaminy, sole nieorganiczne, glukoza i surowica. Surowica jest dodawana do pożywki, ponieważ stanowi źródło czynników wzrostu, hormonów i czynników adhezyjnych. Oprócz dostarczania składników odżywczych pożywka przyczynia się również do utrzymania odpowiedniego poziomu pH i osmolalności.

Rodzaje pożywek stosowanych w hodowli komórkowej

Zarówno komórki ludzkie, jak i zwierzęce można hodować zarówno w pożywkach sztucznych lub syntetycznych, jak i w całkowicie naturalnych pożywkach, uzupełnionych o naturalne składniki. Poniżej przedstawiamy przegląd różnych rodzajów pożywek dostępnych obecnie na rynku.

Pożywki naturalne

W pożywkach naturalnych występują wyłącznie płyny biologiczne występujące w stanie naturalnym. Pożywki naturalne są bardzo pomocne i łatwe w stosowaniu do hodowli szerokiej gamy typów komórek zwierzęcych. Brak dokładnej wiedzy na temat składników tworzących pożywki naturalne jest głównym czynnikiem wpływającym na niską powtarzalność wyników uzyskanych przy ich użyciu.

Pożywki sztuczne

Przygotowanie pożywek sztucznych lub syntetycznych polega na dodaniu składników odżywczych (zarówno organicznych, jak i nieorganicznych), białek surowicy, węglowodanów, kofaktorów, witamin i soli, a także faz gazowych O₂ i CO₂ [1].

Opracowano różne rodzaje pożywek sztucznych w celu spełnienia jednej lub kilku z następujących funkcji: 1) Natychmiastowe utrzymanie przy życiu (zrównoważony roztwór soli o precyzyjnym pH i ciśnieniu osmotycznym). 2) Przedłużone utrzymanie przy życiu (zrównoważony roztwór soli uzupełniony różnymi preparatami związków organicznych i/lub surowicy). 3) Nieograniczony rozwój. 4) Funkcje specjalistyczne.

Istnieją cztery odrębne klasyfikacje pożywek sztucznych:

Pożywki zawierające surowicę

Najczęściej spotykanym dodatkiem w pożywkach stosowanych do hodowli komórek zwierzęcych jest surowica płodowa bydlęca. Dodaje się ją do pożywki hodowlanej jako niedrogi dodatek w celu uzyskania jak najlepszych warunków wzrostu. Oprócz pełnienia roli nośnika lub chelatora dla niestabilnych lub nierozpuszczalnych w wodzie składników odżywczych, hormonów i czynników wzrostu, inhibitorów proteaz oraz innych substancji, surowica wiąże również i neutralizuje szkodliwe cząsteczki.

Pożywki bezsurowicowe

Obecność surowicy w pożywkach ma szereg wad i może powodować poważne błędy w interpretacji wyników badań immunologicznych [2, 3]. Opracowano wiele różnych pożywek bezsurowicowych [4, 5]. Pożywki te są zazwyczaj specjalnie opracowane w celu wspierania hodowli jednego typu komórek, takich jak Knockout Serum Replacement i Knockout DMEM firmy Thermo Fisher Scientific oraz pożywka mTESR firmy Stem Cell Technologies [6], przeznaczona dla komórek macierzystych [7].

Ponadto pożywki te zawierają określone ilości oczyszczonych czynników wzrostu, lipoprotein i innych białek, które w innym przypadku są zazwyczaj dostarczane przez surowicę [8]. Pożywki te są często określane jako „określone pożywki hodowlane”, ponieważ składniki wchodzące w ich skład są dobrze poznane.

Pożywki zdefiniowane chemicznie

Pożywki te zawierają ultraczyste składniki nieorganiczne i organiczne, które nie zostały zanieczyszczone żadnymi substancjami. Mogą one również zawierać dodatki czystych białek, takich jak czynniki wzrostu.

 Modyfikacja genetyczna bakterii lub drożdży, w połączeniu z dodatkiem określonych kwasów tłuszczowych, witamin, cholesterolu i aminokwasów, prowadzi do wytworzenia ich składników [9].

Pożywki bezbiałkowe

Pożywki bezbiałkowe to takie, które nie zawierają w ogóle białka, a zamiast tego zawierają wyłącznie składniki niebiałkowe. W porównaniu z pożywkami z dodatkiem surowicy stosowanie pożywek bez dodatku białka sprzyja większej proliferacji komórek i ekspresji białek oraz ułatwia oczyszczanie wszelkich produktów wytworzonych w procesie dalszej obróbki [10–12]. Białko nie jest zawarte w preparatach takich jak MEM i RPMI-1640. Jednak w razie potrzeby można podać suplement białkowy.

Pożywki hodowlane i ich podstawowe składniki

Dostępne w handlu pożywki hodowlane można nabyć w postaci proszku lub płynu i często zawierają one różnorodne składniki odżywcze, takie jak aminokwasy, glukoza, sole, witaminy i inne suplementy diety. 

Zapotrzebowanie na te składniki jest różne dla każdej linii komórkowej, a różnice te odpowiadają za dużą liczbę różnych receptur pożywek. Każdy składnik pełni określoną funkcję, która zostanie omówiona w poniższych akapitach:

Systemy buforujące

Aby utrzymać optymalne warunki wzrostu, należy kontrolować pH, co często odbywa się za pomocą jednego z dwóch systemów buforujących:

Naturalny system buforujący

Stosunek CO₂/H₂CO₃ w atmosferze jest taki sam jak w pożywce, co tworzy naturalny mechanizm buforujący. Aby zachować ten naturalny mechanizm buforujący, hodowle muszą być utrzymywane w środowisku powietrznym zawierającym 5–10% CO₂, co często osiąga się za pomocą inkubatora z CO₂. Jedną z największych zalet stosowania naturalnego bufora jest jego niski koszt i bezpieczeństwo.

HEPES

Buforowanie chemiczne z wykorzystaniem jonu obojniakowego HEPES charakteryzuje się większą zdolnością buforującą w zakresie pH 7,2–7,4 i nie wymaga regulowanego środowiska gazowego. W przypadku niektórych typów komórek większa dawka HEPES może być szkodliwa. Pożywki zawierające HEPES są również znacznie bardziej podatne na fototoksyczne działanie światła fluorescencyjnego [13].

Czerwień fenolowa

Wskaźnik pH – czerwony fenol – jest często dodawany do dostępnych w handlu pożywek hodowlanych, co pozwala na ciągłe monitorowanie pH. W miarę namnażania się komórek wytwarzane przez nie metabolity powodują zmianę pH, a co za tym idzie – zmianę koloru pożywki. Czerwień fenolowa wywiera podwójny wpływ na barwę pożywki, zabarwiając ją na żółto przy kwaśnym pH i na fioletowo przy pH zasadowym. pH 7,4, czyli optymalna wartość dla hodowli komórkowej, powoduje, że pożywka przybiera fluorescencyjny czerwony kolor.

Czerwony fenol ma jednak kilka wad: po pierwsze, jest w stanie naśladować działanie wielu hormonów steroidowych, przede wszystkim estrogenu [14]. Dlatego podczas badań nad komórkami wrażliwymi na estrogen, takimi jak tkanka piersi, zaleca się stosowanie pożywki wolnej od czerwonego fenolu. Obecność czerwieni fenolowej w kilku preparatach bezsurowicowych zaburza równowagę sodowo-potasową. Dodanie surowicy lub bydlęcego hormonu przysadkowego do pożywki może przeciwdziałać temu efektowi [15]. Po trzecie, obecność czerwieni fenolowej utrudnia wykrywanie w eksperymentach z wykorzystaniem cytometrii przepływowej.

Sole nieorganiczne

Pożywki zawierające sole nieorganiczne, takie jak jony sodu, potasu i wapnia, pomagają utrzymać równowagę osmotyczną i regulują potencjał błonowy.

Aminokwasy

Ponieważ aminokwasy są podstawowymi składnikami białek, stanowią one niezbędny składnik każdej pożywki do hodowli komórek, jaką kiedykolwiek opracowano. Ponieważ komórki nie są w stanie samodzielnie wytworzyć niektórych aminokwasów, ważne jest, aby pożywka hodowlana zawierała aminokwasy egzogenne. Są one niezbędne do proliferacji komórek, a stężenie, w jakim występują, determinuje maksymalną gęstość komórek, jaką można osiągnąć. Szczególnie istotna jest L-glutamina, która jest aminokwasem egzogennym.

L-glutamina pełni funkcję dodatkowego źródła energii dla metabolizmu i dostarcza azotu do produkcji NAD, NADPH oraz nukleotydów. Ponieważ L-glutamina jest niestabilnym aminokwasem, który z upływem czasu przekształca się w postać, której komórki nie są w stanie wykorzystać, należy ją dodawać do pożywki.

Ponadto do pożywki można dodawać aminokwasy nieesencjalne w celu uzupełnienia tych, które zostały zużyte w trakcie procesu wzrostu. Wzbogacenie pożywki wzrostowej o aminokwasy nieesencjalne przyspiesza wzrost komórek i zwiększa ich żywotność.

Węglowodany

Węglowodany w postaci cukrów stanowią główne źródło energii. Wiele pożywek zawiera również maltozę i fruktozę, oprócz bardziej powszechnych cukrów, takich jak glukoza i galaktoza.

Białka i peptydy

Albumina, transferyna i fibronektyna to najczęściej stosowane białka i peptydy. Mają one szczególne znaczenie w pożywkach, które nie zawierają surowicy. Albumina, transferyna, aprotynina, fetuina i fibronektyna to niektóre z białek, które można znaleźć w surowicy, będącej bogatym źródłem białka.

Albumina jest głównym białkiem występującym we krwi, a jej funkcją jest wiązanie i transport różnych substancji, w tym wody, soli, wolnych kwasów tłuszczowych, hormonów i witamin, między różnymi narządami i komórkami. Zdolność albuminy do wiązania się z substancjami chemicznymi sprawia, że jest ona skutecznym środkiem do usuwania szkodliwych związków z pożywki, w której hodowane są komórki.

Aprotynina jest środkiem ochronnym w systemach hodowli komórkowej, ponieważ jest stabilna w środowisku o pH obojętnym i kwaśnym, a także odporna na wysokie temperatury i zniszczenie, jakie mogą powodować enzymy proteolityczne. Jest w stanie hamować działanie wielu proteaz serynowych, w tym między innymi trypsyny.

Fetuina jest glikoproteiną, której stężenie w surowicy płodów i noworodków zwierząt może być wyższe niż w surowicy dorosłych osobników. Ponadto pełni ona rolę inhibitora proteaz serynowych. Białko fibronektyna jest niezbędnym składnikiem procesu adhezji komórkowej. Transferyna to białko transportujące żelazo, odpowiedzialne za dostarczanie żelaza do błon komórkowych.

Kwasy tłuszczowe i lipidy

Odgrywają kluczową rolę w pożywkach bezsurowicowych, gdy nie ma surowicy.

Witaminy

Liczne witaminy są niezbędne do rozwoju i proliferacji komórek. Komórki nie są w stanie wytworzyć witamin w wystarczających ilościach, dlatego w hodowli tkankowej są one niezbędne jako suplementy diety.

W hodowli komórkowej surowica jest głównym źródłem witamin; jednak pożywki są również wzbogacane różnymi witaminami, aby dostosować je do konkretnego typu komórek. Najczęściej do stymulacji wzrostu stosuje się witaminy z grupy B.

Pierwiastki śladowe

Pierwiastki chemiczne, takie jak miedź, cynk, selen oraz półprodukty kwasu trikarboksylowego, są znane jako pierwiastki śladowe. Pierwiastki śladowe są często dodawane do pożywek niezawierających surowicy w celu zastąpienia tych, które zazwyczaj występują w surowicy. Pierwiastki te są ważnymi składnikami chemicznymi niezbędnymi do zdrowego rozwoju komórek. Wiele reakcji biochemicznych, takich jak aktywność enzymów, zależy od określonych mikroelementów.

Suplementy pożywki

Pełna pożywka wzrostowa zalecana dla niektórych linii komórkowych wymaga dodatkowych składników, których brakuje w pożywkach bazowych i surowicy. Te suplementy diety wspomagają wzrost komórek i prawidłowe funkcjonowanie metaboliczne.

Chociaż hormony, czynniki wzrostu i cząsteczki sygnałowe są niezbędne do prawidłowej proliferacji określonych linii komórkowych, należy zawsze stosować następujące środki ostrożności: Ponieważ dodanie suplementów może zmienić osmolalność kompletnej pożywki wzrostowej, co może hamować rozwój komórek, zawsze zaleca się sprawdzenie osmolalności po dodaniu suplementów. W przypadku większości linii komórkowych optymalna osmolalność wynosi od 260 do 320 mOSM/kg.

Antybiotyki

Antybiotyki są często stosowane w celu zahamowania rozwoju zanieczyszczeń bakteryjnych i grzybiczych [16], chociaż nie są one niezbędne do wzrostu komórek. Ponieważ antybiotyki mogą maskować zakażenie mykoplazmami i opornymi bakteriami, nie zaleca się ich rutynowego stosowania w hodowli komórkowej [17, 18].

Ponadto antybiotyki mogą zakłócać metabolizm komórek nadwrażliwych. Często stosuje się mieszanki penicyliny i streptomycyny produkowane przez firmy MilliporeSigma i Life Technologies. Plasmocin był stosowany w hodowli linii komórkowych glejaka TS603, TS516 i BT260 [19] i wykazał skuteczność w usuwaniu zanieczyszczenia mykoplazmami (20).

Surowica

W surowicy występują albuminy, czynniki wzrostu oraz inhibitory wzrostu. Surowica jest jednym z najważniejszych składników pożywki do hodowli komórkowej, ponieważ dostarcza aminokwasów, białek, witamin (zwłaszcza witamin rozpuszczalnych w tłuszczach, takich jak A, D, E i K), węglowodanów, lipidów, hormonów, czynników wzrostu, minerałów i pierwiastków śladowych.

W celu wspomagania rozwoju hodowanych komórek często wykorzystuje się surowicę pochodzącą od płodów i cieląt. Surowica płodowa stanowi bogate źródło czynników wzrostu i nadaje się do klonowania komórek oraz rozwoju komórek wrażliwych. Ze względu na zmniejszone właściwości stymulujące wzrost surowica cielęca jest stosowana w eksperymentach dotyczących hamowania kontaktu. Standardowe pożywki hodowlane często zawierają od 2% do 10% surowicy. Dodanie surowicy do pożywki hodowlanej służy następującym celom [21]:

  • Surowica dostarcza komórkom niezbędnych składników odżywczych (zarówno w roztworze, jak i związanych z białkami).

  • W surowicy zawarte jest kilka czynników wzrostu i hormonów biorących udział w stymulacji wzrostu oraz wyspecjalizowanej aktywności komórek.

  • Zawiera wiele białek wiążących, takich jak albumina i transferyna, które transportują inne substancje chemiczne do komórek. Na przykład albumina dostarcza do komórek tłuszcze, witaminy, hormony itp.

  • Dostarcza również białka, takie jak fibronektyna, które zwiększają przyczepność komórek do podłoża. Ponadto wytwarza czynniki rozprzestrzeniające, które wspomagają ekspansję komórek przed podziałem.

  • Dostarcza ono inhibitory proteaz, które zapobiegają proteolizie w komórkach.

  • Zawiera również minerały, takie jak Na+, K+, Zn2+ i Fe2+.

  • Zwiększa lepkość pożywki, chroniąc w ten sposób komórki przed uszkodzeniami mechanicznymi podczas mieszania hodowli w zawiesinie.

  • Pełni również funkcję bufora.

Bibliografia

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Odżywianie komórek zwierzęcych w hodowli tkankowej; wstępne badania nad pożywką syntetyczną. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Szybka adsorpcja składnika surowicy płodowej cielęcej przez komórki ssaków w hodowli. Potencjalne źródło artefaktów w badaniach surowic przeciwko antygenom specyficznym dla komórek. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Dodanie surowicy do pożywki stosowanej do przygotowania zawiesin komórkowych jako potencjalne źródło artefaktów w reakcjach komórkowych badanych za pomocą testu węzła chłonnego podkolanowego. J Immunogenet. 1980;7:483-9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercyjne pożywki bezsurowicowe: wzrost hybrydomów i produkcja przeciwciał monoklonalnych. J Immunol Methods. 1991;145:175-83

[5] Barnes D, Sato G. Metody hodowli komórek w pożywkach bezsurowicowych. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O i in. Białka opiekuńcze HSP70 transportują białko TDP-43 pozbawione RNA do anizotropowych, płynnych, sferycznych powłok wewnątrzjądrowych. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J i in. Starzenie się komórek wywołane zespołem Downa zaburza architekturę jądra komórkowego progenitorów neuronowych. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Całkowite zastąpienie surowicy albuminą, transferyną i lipidami sojowymi w hodowlach limfocytów B reagujących na lipopolisacharydy. J Exp Med. 1978;147:923-33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematyczne udoskonalanie chemicznie zdefiniowanej, bezbiałkowej pożywki do hodowli hybrydomów i produkcji przeciwciał monoklonalnych. J Biotechnol. 1996;45:111-23

[10] Darfler F. Pożywka bezbiałkowa do hodowli hybrydomów i innych komórek układu odpornościowego. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78

[11] Barnes D, Sato G. Hodowla komórkowa bez surowicy: podejście ujednolicające. Cell. 1980;22:649-55

[12] Hamilton W, Ham R. Wzrost klonalny linii komórkowych chińskiego chomika w pożywkach bezbiałkowych. In Vitro. 1977;13:537-47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analiza cytotoksycznego działania poddanego działaniu światła pożywki hodowlanej zawierającej HEPES. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Czerwień fenolowa w pożywkach do hodowli tkankowej jest słabym estrogenem: implikacje dla badań nad komórkami reagującymi na estrogen w hodowli. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500

[15] Karmiol S. Opracowanie pożywek bezsurowicowych. W: Master JRW, red. Animal Cell culture, wyd. 3. Oxford: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Stosowanie antybiotyków w pożywkach do hodowli komórkowej. Methods Enzymol. 1979;58:110-6

[17] McGarrity G. Rozprzestrzenianie się i zwalczanie zakażeń mykoplazmowych w hodowlach komórkowych. In Vitro. 1976;12:643-8

[18] Masters J, Stacey G. Wymiana pożywki i pasażowanie linii komórkowych. Nat Protoc. 2007;2:2276–84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M i in. Demetylaza histonowa KDM6A bezpośrednio wykrywa tlen, regulując chromatynę i los komórki. Science. 2019;363:1217-1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M i in. Skuteczność preparatu Plasmocin™ w różnych liniach komórkowych ssaków zakażonych mollicutes w porównaniu z powszechnie stosowanymi antybiotykami w hodowli komórkowej: lokalne doświadczenia. Cytotechnology. 2011;63:609-20

[21] Kragh Hansen U. Molekularne aspekty wiązania ligandów z albuminą surowicy. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53