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Células SH-SY5Y
Tecido
Medula óssea
Doença
Neuroblastoma
Local da metástase
Medula óssea
Sinónimos
SH-Sy5y, SHSY5Y, SHSY-5Y, SK-SH-SY5Y, SY5Y, SH-SY5Y Parental

Documentos

Células SH-SY5Y

Cell line · Número do produto 300154

As células SH-SY5Y, um subclone derivado da linha celular cancerígena de neuroblastoma SK-N-SH, constituem um modelo celular valioso para doenças neurodegenerativas, tais como a doença de Parkinson...

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01Informações gerais

Descrição

As células SH-SY5Y, um subclone derivado da linha celular de cancro neuroblastoma SK-N-SH, são um modelo celular valioso para doenças neurodegenerativas como as doenças de Parkinson e de Alzheimer. A linha celular SK-N-SH foi criada em 1970 a partir de uma biopsia de um tumor ósseo metastático de um doente com cancro de 4 anos de idade. A linha celular SH-SY5Y humana oferece uma fonte celular única para estudos funcionais em neurobiologia e investigação de doenças neurodegenerativas.

As células SH-SY5Y crescem de forma aderente e em suspensão, formando aglomerados durante a divisão que diferem significativamente da morfologia das células diferenciadas. Estas células indiferenciadas, antes de sofrerem diferenciação neuronal, servem de base essencial para estudos neurocientíficos.

A diferenciação neuronal das células SH-SY5Y, que as transforma em modelos de células neuronais semelhantes a vários neurónios funcionais, é conseguida através de processos de interconversão bioquímica que envolvem a privação gradual de soro, ácido retinóico, factores neurotróficos, como o fator neurotrófico derivado do cérebro, e proteínas da matriz extracelular. Esta diferenciação é crucial para o estudo de marcadores neuronais e para a realização de investigação neurotoxicológica, especialmente no que diz respeito ao impacto de poluentes orgânicos em células semelhantes a neurónios humanos.

A neurobiologia das células de neuroblastoma SH-SY5Y, conhecidas principalmente pelas suas caraterísticas dopaminérgicas, pode ser explorada quanto às propriedades colinérgicas em condições de diferenciação específicas. Embora estas células possam expressar acetilcolinesterase, o que indica alguma atividade colinérgica, a sua utilidade no estudo da neurotransmissão colinérgica é menos pronunciada do que o seu papel nos estudos do sistema dopaminérgico.

Como modelo neurotoxicológico, a linha celular de neuroblastoma SH-SY5Y é fundamental para examinar os efeitos dos compostos nas actividades da acetilcolinesterase e da butirilcolinesterase, essenciais para os estudos neurotoxicológicos. A contribuição da linha sy5y para a compreensão das vias bioquímicas envolvidas nas doenças neurodegenerativas, associada ao seu papel nos estudos funcionais dos sistemas dopaminérgico e colinérgico, sublinha o seu valor na investigação em neurociências.

Tecido
Medula óssea
Doença
Neuroblastoma
Local da metástase
Medula óssea
Sinónimos
  • SH-Sy5y
  • SHSY5Y
  • SHSY-5Y
  • SK-SH-SY5Y
  • SY5Y
  • SH-SY5Y Parental

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
As células crescem como aglomerados de células neuroblásticas com processos celulares múltiplos, curtos e finos (neurites). As células agregam-se, formam aglomerados e flutuam. Não se forma uma monocamada confluente.
Tipo de célula
Neuroblastos
Tumorigénico
Forma tumores em ratinhos nus em cerca de 3-4 semanas.
Cariótipo
A paisagem citogenética das células SH-SY5Y é marcada por aberrações cromossómicas complexas, nomeadamente com um número cromossómico modal de 47, incluindo a trissomia do 1q devido a uma inserção distinta no cromossoma 1. Este cenário genético é crucial para a compreensão da biologia celular e do potencial oncogénico das células SH-SY5Y, tornando-as um modelo versátil na investigação neurocientífica, particularmente nos domínios do neurodesenvolvimento, da neurotoxicidade e do estudo das doenças neurodegenerativas.

04Identificadores

Referência
SH-SY5Y (número de catálogo Cytion 300154)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0019

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
Misturar EMEM e Ham's F12 numa proporção de 50:50 (números de artigo Cytion 820100a e 820600a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Suplementar o meio com 15% de FBS e 1% de NEAA
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Estas células crescem como uma mistura de células flutuantes e aderentes. Remover o meio com as células flutuantes e recuperar as células por centrifugação. Lavar as células aderentes com PBS sem cálcio e magnésio (3-5 ml de PBS para T25, 5-10 ml para frascos de cultura de células T75). Adicionar Accutase (1-2 ml por T25, 2,5 ml por frasco de cultura de células T75), devendo a folha de células ser completamente coberta. Incubar a 37 graus Celsius durante 10 minutos. Combinar com as células flutuantes recuperadas acima. Ressuspender cuidadosamente as células, a adição de meio é opcional mas não necessária, e distribuir em novos frascos que contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
Densidade de semeadura após descongelamento 6x104 células/cm2, semear em frasco de cultura celular 1x T25. As células tornar-se-ão 80-90% confluentes dentro de 1-2 semanas. Quando as células proliferarem vigorosamente, semear as células a uma densidade de 1 - 2 x104 células/cm2.
Renovação de fluidos
1 a 2 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos 50% de meio basal + 40% de FBS + 10% de DMSO, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
4 anos