CRFK

CRFK (Crandell-Rees Kedi Böbreği) hücre hattı, normal bir kedi embriyosunun böbrek korteksinden elde edilen, yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Bu hücre hattı, viroloji araştırmalarında, özellikle kedi bulaşıcı peritonit virüsü (FIPV) ve kedi herpesvirüsü (FHV-1) gibi kedi virüslerinin incelenmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. CRFK hücreleri, çeşitli kedi virüslerine karşı son derece duyarlıdır; bu da onları aşı geliştirme ve virolojik analizler için çok değerli kılmaktadır. Örneğin, bu hücreler, kedi rinotrakeiti, kalisivirüs ve panlötokopeniye karşı koruma sağlayan FVRCP aşıları gibi canlı zayıflatılmış aşıların üretiminde ve test edilmesinde kullanılır. Hücre hattının viral replikasyon çalışmalarındaki rolü, konak-virüs etkileşimleri ve sincit oluşumu ile hücresel morfolojideki değişiklikler gibi virüs kaynaklı sitopatik etkiler hakkında önemli bilgiler sağlamıştır.

Son zamanlarda yapılan araştırmalar, endojen retrovirüslerin (ERV'ler) oluşturduğu kontaminasyon riskleri nedeniyle aşı geliştirme amacıyla CRFK hücrelerinin kullanımına ilişkin zorlukları ortaya koymuştur. Özellikle, CRFK hücreleri rekombinasyon olayları yoluyla bulaşıcı bir kedi endojen retrovirüsü olan RD-114 virüsünü üretebilir. Bu güvenlik endişelerini gidermek için, TALEN’ler gibi genom düzenleme teknolojileri kullanılarak RD-114 ile ilişkili dizilerin env genleri devre dışı bırakılmış ve böylece aşı üretiminde ERV kontaminasyonu riski azaltılmıştır. Bu modifikasyonlar CRFK hücrelerinin canlılığını tehlikeye atmaz ve mühendislikle değiştirilmiş RDKO_CRFK hücreleri, biyolojik ilaçların üretiminde kullanım için iyileştirilmiş güvenlik profilleri sergilemiştir.

Ayrıca, CRFK hücrelerinin transkriptomik analizleri, viral enfeksiyonlara yanıt olarak farklı gen ekspresyon profilleri sergilediklerini ortaya koymuştur. FIPV enfeksiyonu üzerine, CRFK hücreleri Toll benzeri reseptör sinyalleşmesi, MAPK ve JAK-STAT yolakları dahil olmak üzere çeşitli bağışıklıkla ilgili yolakların ekspresyonunu artırırken, nöronal ve hücresel organizasyonda rol oynayan yolaklarda da önemli bir azalma sergilemektedir. Bu ekspresyon değişiklikleri, epitel hücrelerinde aktive olan doğuştan gelen bağışıklık tepkilerini yansıtmakta ve benzer koşullar altında farklı konakçı tepkileri sergileyen makrofajlar gibi birincil bağışıklık hücrelerine kıyasla farklılıkları ortaya koymaktadır. Bu tür bulgular, erken aşamadaki konak-patojen etkileşimlerinin modellenmesinde ve antiviral stratejilerin değerlendirilmesinde CRFK hücrelerinin yararını vurgulamaktadır.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın