CRFK

สายเซลล์ CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) เป็นแบบจำลองที่ได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวาง ซึ่งสกัดจากเปลือกไตของตัวอ่อนแมวปกติ เซลล์สายนี้ถูกใช้อย่างแพร่หลายในการวิจัยด้านไวรัสวิทยา โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาไวรัสของแมว เช่น ไวรัสโรคเยื่อบุช่องท้องอักเสบติดเชื้อในแมว (FIPV) และไวรัสเฮอร์ปีส์ในแมว (FHV-1) เซลล์ CRFK มีความสามารถสูงในการรองรับไวรัสแมวต่าง ๆ ซึ่งทำให้เซลล์เหล่านี้มีคุณค่าอย่างยิ่งต่อการพัฒนาวัคซีนและการทดสอบทางไวรัสวิทยา ตัวอย่างเช่น เซลล์เหล่านี้ถูกใช้ในการผลิตและทดสอบวัคซีนเชื้ออ่อนแบบมีชีวิต เช่น วัคซีน FVRCP ซึ่งช่วยป้องกันโรคริโนทราคีติสในแมว ไวรัสคาลิซี และโรคแพนลิวโคเพเนีย บทบาทของสายเซลล์นี้ในการศึกษาการจำลองตัวของไวรัสได้เปิดเผยข้อมูลสำคัญเกี่ยวกับปฏิสัมพันธ์ระหว่างโฮสต์กับไวรัส และผลกระทบทางเซลล์ที่เกิดจากไวรัส เช่น การก่อตัวของซินซิเทียม และการเปลี่ยนแปลงในรูปทรงของเซลล์

การวิจัยล่าสุดได้ชี้ให้เห็นถึงความท้าทายที่เกี่ยวข้องกับการใช้เซลล์ CRFK ในการพัฒนาวัคซีน เนื่องจากความเสี่ยงจากการปนเปื้อนของเรโทรไวรัสภายในตัว (ERVs) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เซลล์ CRFK สามารถผลิตไวรัส RD-114 ที่ติดเชื้อได้ ซึ่งเป็นเรโทรไวรัสภายในตัวแมว ผ่านกระบวนการรีคอมบิเนชัน เพื่อแก้ไขปัญหาด้านความปลอดภัยนี้ ได้มีการใช้เทคโนโลยีการแก้ไขจีโนม เช่น TALENs เพื่อปิดการทำงานของยีน env ในลำดับที่เกี่ยวข้องกับ RD-114 ซึ่งช่วยลดความเสี่ยงของการปนเปื้อน ERV ในการผลิตวัคซีน การปรับเปลี่ยนเหล่านี้ไม่ส่งผลกระทบต่อความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์ CRFK และเซลล์ RDKO_CRFK ที่ได้รับการดัดแปลงได้แสดงให้เห็นถึงโปรไฟล์ความปลอดภัยที่ดีขึ้นสำหรับการใช้งานในการผลิตผลิตภัณฑ์ชีวภาพ

นอกจากนี้ การวิเคราะห์ทรานสคริปโตมิกส์ของเซลล์ CRFK ได้แสดงให้เห็นถึงโปรไฟล์การแสดงออกของยีนที่แตกต่างกันเมื่อตอบสนองต่อการติดเชื้อไวรัส เมื่อถูกติดเชื้อ FIPV เซลล์ CRFK จะเพิ่มการแสดงออกของเส้นทางที่เกี่ยวข้องกับระบบภูมิคุ้มกันต่าง ๆ รวมถึงสัญญาณของตัวรับ Toll-like, MAPK และ JAK-STAT ในขณะเดียวกันก็แสดงการลดการแสดงออกอย่างมีนัยสำคัญของเส้นทางที่เกี่ยวข้องกับการจัดระเบียบของเซลล์ประสาทและเซลล์ การเปลี่ยนแปลงการแสดงออกเหล่านี้สะท้อนถึงการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติที่ถูกกระตุ้นในเซลล์เยื่อบุผิว และเน้นย้ำความแตกต่างเมื่อเทียบกับเซลล์ภูมิคุ้มกันปฐมภูมิ เช่น แมคโครฟาจ ซึ่งแสดงการตอบสนองของโฮสต์ที่แตกต่างกันภายใต้เงื่อนไขที่คล้ายคลึงกัน ผลการศึกษาดังกล่าวเน้นย้ำถึงประโยชน์ของเซลล์ CRFK ในการสร้างแบบจำลองปฏิสัมพันธ์ระหว่างโฮสต์กับเชื้อโรคในระยะเริ่มต้น และการประเมินกลยุทธ์ต้านไวรัส

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.