CRFK

A linhagem celular CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) é um modelo bem estabelecido, derivado do córtex renal de um embrião felino normal. Ela é amplamente utilizada em pesquisas virológicas, particularmente para o estudo de vírus felinos, como o vírus da peritonite infecciosa felina (FIPV) e o herpesvírus felino (FHV-1). As células CRFK são altamente receptivas a vários vírus felinos, o que as tornou inestimáveis para o desenvolvimento de vacinas e ensaios virológicos. Por exemplo, essas células são utilizadas na produção e nos testes de vacinas vivas atenuadas, como as vacinas FVRCP, que protegem contra a rinotraqueíte felina, o calicivírus e a panleucopenia. O papel da linhagem celular em estudos de replicação viral revelou insights fundamentais sobre as interações hospedeiro-vírus e os efeitos citopáticos induzidos por vírus, como a formação de sincícios e alterações na morfologia celular.

Pesquisas recentes destacaram os desafios associados ao uso de células CRFK no desenvolvimento de vacinas devido aos riscos de contaminação representados por retrovírus endógenos (ERVs). Especificamente, as células CRFK podem produzir o vírus RD-114 infeccioso, um retrovírus endógeno felino, por meio de eventos de recombinação. Para resolver essas questões de segurança, tecnologias de edição de genoma, como os TALENs, foram empregadas para inativar os genes env das sequências relacionadas ao RD-114, reduzindo o risco de contaminação por ERV na produção de vacinas. Essas modificações não comprometem a viabilidade das células CRFK, e as células RDKO_CRFK modificadas genicamente demonstraram perfis de segurança aprimorados para uso na fabricação de produtos biológicos.

Além disso, análises transcriptômicas das células CRFK demonstraram seus perfis diferenciados de expressão gênica em resposta a infecções virais. Após a infecção pelo FIPV, as células CRFK regulam positivamente várias vias relacionadas ao sistema imunológico, incluindo a sinalização do receptor Toll-like, as vias MAPK e JAK-STAT, ao mesmo tempo em que apresentam uma regulação negativa significativa das vias envolvidas na organização neuronal e celular. Essas alterações na expressão refletem as respostas imunes inatas ativadas nas células epiteliais e destacam diferenças em relação às células imunes primárias, como os macrófagos, que exibem respostas distintas do hospedeiro em condições semelhantes. Tais descobertas ressaltam a utilidade das células CRFK na modelagem de interações hospedeiro-patógeno em estágio inicial e na avaliação de estratégias antivirais.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.