CRFK

A linha celular CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) é um modelo bem estabelecido, derivado do córtex renal de um embrião felino normal. É amplamente utilizada na investigação virológica, particularmente no estudo de vírus felinos, tais como o vírus da peritonite infecciosa felina (FIPV) e o herpesvírus felino (FHV-1). As células CRFK são altamente receptivas a vários vírus felinos, o que as tornou inestimáveis para o desenvolvimento de vacinas e ensaios virológicos. Por exemplo, estas células são utilizadas na produção e teste de vacinas vivas atenuadas, como as vacinas FVRCP, que protegem contra a rinotraqueíte felina, o calicivírus e a panleucopenia. O papel da linha celular em estudos de replicação viral revelou informações fundamentais sobre as interações hospedeiro-vírus e os efeitos citopáticos induzidos pelo vírus, tais como a formação de sincícios e alterações na morfologia celular.

Investigação recente destacou os desafios associados à utilização de células CRFK no desenvolvimento de vacinas, devido aos riscos de contaminação decorrentes de retrovírus endógenos (ERVs). Mais especificamente, as células CRFK podem produzir o vírus RD-114 infeccioso, um retrovírus endógeno felino, através de eventos de recombinação. Para dar resposta a estas preocupações de segurança, foram empregues tecnologias de edição do genoma, como os TALENs, para inativar os genes env das sequências relacionadas com o RD-114, reduzindo o risco de contaminação por ERV na produção de vacinas. Estas modificações não comprometem a viabilidade das células CRFK, e as células RDKO_CRFK modificadas demonstraram perfis de segurança melhorados para utilização no fabrico de produtos biológicos.

Além disso, análises transcriptómicas das células CRFK demonstraram os seus perfis diferenciados de expressão génica em resposta a infeções virais. Após a infeção pelo FIPV, as células CRFK regulam positivamente várias vias relacionadas com o sistema imunitário, incluindo a sinalização dos recetores Toll-like, as vias MAPK e JAK-STAT, ao mesmo tempo que apresentam uma regulação negativa significativa das vias envolvidas na organização neuronal e celular. Estas alterações de expressão refletem as respostas imunitárias inatas ativadas nas células epiteliais e destacam diferenças em comparação com células imunitárias primárias, tais como os macrófagos, que exibem respostas distintas do hospedeiro em condições semelhantes. Tais descobertas sublinham a utilidade das células CRFK na modelação de interações hospedeiro-patógeno em fase inicial e na avaliação de estratégias antivirais.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia