CRFK

CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) -solulinja on vakiintunut malli, joka on peräisin normaalin kissanalkion munuaiskuoresta. Sitä käytetään laajalti virologisessa tutkimuksessa, erityisesti kissavirusten, kuten kissan tarttuvan peritoniittiviruksen (FIPV) ja kissan herpesviruksen (FHV-1), tutkimuksessa. CRFK-solut ovat erittäin alttiita erilaisille kissaviruksille, minkä vuoksi ne ovat korvaamattomia rokotteiden kehittämisessä ja virologisissa määrityksissä. Näitä soluja käytetään esimerkiksi elävien heikennettyjen rokotteiden, kuten FVRCP-rokotteiden, tuotannossa ja testauksessa. Nämä rokotteet suojaavat kissan rinotrakeiitiltä, kalikivirukselta ja panleukopeniasta. Solulinjan rooli virusten replikaatiotutkimuksissa on tuonut esiin tärkeitä havaintoja isäntä-virus-vuorovaikutuksista ja virusten aiheuttamista sytopaattisista vaikutuksista, kuten synkytiumien muodostumisesta ja solujen morfologian muutoksista.

Viimeaikaiset tutkimukset ovat tuoneet esiin haasteita, jotka liittyvät CRFK-solujen käyttöön rokotteiden kehittämisessä endogeenisten retrovirusten (ERV) aiheuttamien kontaminaatioriskien vuoksi. Erityisesti CRFK-solut voivat tuottaa tarttuvaa RD-114-virusta, joka on kissan endogeeninen retrovirus, rekombinaatiotapahtumien kautta. Näiden turvallisuusriskien ratkaisemiseksi on käytetty genominmuokkaustekniikoita, kuten TALEN-tekniikkaa, RD-114-sekvensseihin liittyvien env-geenien poistamiseksi, mikä vähentää ERV-kontaminaation riskiä rokotetuotannossa. Nämä muutokset eivät heikennä CRFK-solujen elinkelpoisuutta, ja muokatut RDKO_CRFK-solut ovat osoittaneet parantuneita turvallisuusprofiileja biologisten lääkkeiden valmistuksessa.

Lisäksi CRFK-solujen transkriptomianalyysit ovat osoittaneet niiden erilaiset geeniekspressioprofiilit vasteena virusinfektioille. FIPV-infektion yhteydessä CRFK-solut aktivoivat useita immuunijärjestelmään liittyviä reittejä, kuten Toll-kaltaisten reseptorien signalointia, MAPK- ja JAK-STAT-reittejä, samalla kun ne ilmentävät merkittävää alenemaa hermosolujen ja solujen organisoitumiseen liittyvissä reiteissä. Nämä ilmentymismuutokset heijastavat epiteelisoluissa aktivoituvia luontaisia immuunivasteita ja korostavat eroja verrattuna primaarisiin immuunisoluihin, kuten makrofageihin, jotka osoittavat erilaisia isäntävasteita vastaavissa olosuhteissa. Tällaiset havainnot korostavat CRFK-solujen hyödyllisyyttä varhaisvaiheen isäntä-patogeenivuorovaikutusten mallintamisessa ja antiviraalisten strategioiden arvioinnissa.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa