CRFK

La línea celular CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) es un modelo bien establecido derivado de la corteza renal de un embrión felino normal. Se utiliza ampliamente en la investigación virológica, particularmente para el estudio de virus felinos como el virus de la peritonitis infecciosa felina (FIPV) y el herpesvirus felino (FHV-1). Las células CRFK son altamente receptivas a diversos virus felinos, lo que las ha convertido en un recurso invaluable para el desarrollo de vacunas y ensayos virológicos. Por ejemplo, estas células se utilizan en la producción y prueba de vacunas vivas atenuadas, como las vacunas FVRCP, que protegen contra la rinotraqueítis felina, el calicivirus y la panleucopenia. El papel de esta línea celular en los estudios de replicación viral ha revelado información clave sobre las interacciones entre el huésped y el virus, así como sobre los efectos citopáticos inducidos por el virus, tales como la formación de sincitios y los cambios en la morfología celular.

Investigaciones recientes han puesto de relieve los desafíos asociados al uso de células CRFK para el desarrollo de vacunas debido a los riesgos de contaminación que plantean los retrovirus endógenos (ERV). Específicamente, las células CRFK pueden producir el virus RD-114 infeccioso, un retrovirus endógeno felino, a través de eventos de recombinación. Para abordar estas preocupaciones de seguridad, se han empleado tecnologías de edición del genoma, como los TALEN, para eliminar los genes env de las secuencias relacionadas con el RD-114, lo que reduce el riesgo de contaminación por ERV en la producción de vacunas. Estas modificaciones no comprometen la viabilidad de las células CRFK, y las células RDKO_CRFK modificadas genéticamente han demostrado perfiles de seguridad mejorados para su uso en la fabricación de productos biológicos.

Además, los análisis transcriptómicos de las células CRFK han demostrado sus perfiles diferenciales de expresión génica en respuesta a infecciones virales. Tras la infección con el virus de la FIP (FIPV), las células CRFK regulan al alza diversas vías relacionadas con el sistema inmunológico, incluyendo la señalización de los receptores Toll-like, las vías MAPK y JAK-STAT, al tiempo que muestran una regulación a la baja significativa de las vías involucradas en la organización neuronal y celular. Estos cambios en la expresión reflejan las respuestas inmunitarias innatas activadas en las células epiteliales y resaltan las diferencias en comparación con las células inmunitarias primarias, como los macrófagos, que exhiben respuestas distintas del huésped en condiciones similares. Dichos hallazgos subrayan la utilidad de las células CRFK para modelar las interacciones entre el huésped y el patógeno en etapas tempranas y para evaluar estrategias antivirales.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.