CRFK

La lignée cellulaire CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) est un modèle bien établi dérivé du cortex rénal d’un embryon félin normal. Elle est largement utilisée dans la recherche en virologie, en particulier pour l'étude de virus félins tels que le virus de la péritonite infectieuse féline (FIPV) et l'herpèsvirus félin (FHV-1). Les cellules CRFK sont hautement réceptives à divers virus félins, ce qui les rend inestimables pour le développement de vaccins et les essais virologiques. Par exemple, ces cellules sont utilisées dans la production et l’évaluation de vaccins vivants atténués, comme les vaccins FVRCP, qui protègent contre la rhinotrachéite féline, le calicivirus et la panleucopénie. Le rôle de cette lignée cellulaire dans les études sur la réplication virale a permis d’acquérir des connaissances essentielles sur les interactions hôte-virus et les effets cytopathiques induits par les virus, tels que la formation de syncytiums et les modifications de la morphologie cellulaire.

Des recherches récentes ont mis en évidence les défis liés à l’utilisation des cellules CRFK pour le développement de vaccins en raison des risques de contamination posés par les rétrovirus endogènes (ERV). Plus précisément, les cellules CRFK peuvent produire le virus RD-114 infectieux, un rétrovirus endogène félin, par le biais d’événements de recombinaison. Pour répondre à ces préoccupations en matière de sécurité, des technologies d’édition génomique telles que les TALEN ont été utilisées pour inactiver les gènes env des séquences liées au RD-114, réduisant ainsi le risque de contamination par les RET dans la production de vaccins. Ces modifications ne compromettent pas la viabilité des cellules CRFK, et les cellules RDKO_CRFK modifiées ont démontré des profils de sécurité améliorés pour leur utilisation dans la fabrication de produits biologiques.

De plus, des analyses transcriptomiques des cellules CRFK ont mis en évidence leurs profils d’expression génique différentiels en réponse aux infections virales. Lors d’une infection par le FIPV, les cellules CRFK régulent à la hausse diverses voies liées à l’immunité, notamment la signalisation des récepteurs Toll-like, les voies MAPK et JAK-STAT, tout en présentant une régulation à la baisse significative des voies impliquées dans l’organisation neuronale et cellulaire. Ces changements d’expression reflètent les réponses immunitaires innées activées dans les cellules épithéliales et mettent en évidence des différences par rapport aux cellules immunitaires primaires, telles que les macrophages, qui présentent des réponses de l’hôte distinctes dans des conditions similaires. Ces résultats soulignent l’utilité des cellules CRFK pour modéliser les interactions hôte-pathogène à un stade précoce et évaluer les stratégies antivirales.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.