CRFK

La linea cellulare CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) è un modello consolidato derivato dalla corteccia renale di un embrione felino normale. È ampiamente utilizzata nella ricerca virologica, in particolare per lo studio di virus felini quali il virus della peritonite infettiva felina (FIPV) e l’herpesvirus felino (FHV-1). Le cellule CRFK sono altamente permissive nei confronti di vari virus felini, il che le ha rese preziose per lo sviluppo di vaccini e per i test virologici. Ad esempio, queste cellule vengono utilizzate nella produzione e nella sperimentazione di vaccini vivi attenuati, come i vaccini FVRCP, che proteggono dalla rinotracheite felina, dal calicivirus e dalla panleucopenia. Il ruolo della linea cellulare negli studi sulla replicazione virale ha fornito informazioni fondamentali sulle interazioni ospite-virus e sugli effetti citopatici indotti dal virus, quali la formazione di sincizi e le alterazioni della morfologia cellulare.

Ricerche recenti hanno evidenziato le difficoltà legate all’uso delle cellule CRFK per lo sviluppo di vaccini a causa dei rischi di contaminazione rappresentati dai retrovirus endogeni (ERV). Nello specifico, le cellule CRFK possono produrre il virus infettivo RD-114, un retrovirus endogeno felino, attraverso eventi di ricombinazione. Per affrontare queste preoccupazioni relative alla sicurezza, sono state impiegate tecnologie di editing genomico come i TALEN per inattivare i geni env delle sequenze correlate all’RD-114, riducendo il rischio di contaminazione da ERV nella produzione di vaccini. Queste modifiche non compromettono la vitalità delle cellule CRFK e le cellule RDKO_CRFK ingegnerizzate hanno dimostrato profili di sicurezza migliorati per l’impiego nella produzione di prodotti biologici.

Inoltre, le analisi trascrittomiche delle cellule CRFK hanno dimostrato i loro profili di espressione genica differenziale in risposta alle infezioni virali. A seguito dell’infezione da FIPV, le cellule CRFK sovraregolano varie vie legate al sistema immunitario, tra cui la segnalazione dei recettori Toll-like, le vie MAPK e JAK-STAT, mentre mostrano anche una significativa sottoregolazione delle vie coinvolte nell’organizzazione neuronale e cellulare. Questi cambiamenti di espressione riflettono le risposte immunitarie innate attivate nelle cellule epiteliali ed evidenziano le differenze rispetto alle cellule immunitarie primarie, come i macrofagi, che mostrano risposte dell’ospite distinte in condizioni simili. Tali risultati sottolineano l’utilità delle cellule CRFK nella modellizzazione delle interazioni ospite-patogeno nelle fasi iniziali e nella valutazione delle strategie antivirali.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia