CRFK

Die CRFK-Zelllinie (Crandell-Rees Feline Kidney) ist ein etabliertes Modell, das aus der Nierenrinde eines normalen Katzenembryos gewonnen wurde. Sie findet breite Anwendung in der virologischen Forschung, insbesondere bei der Untersuchung von Katzenviren wie dem Virus der infektiösen Peritonitis bei Katzen (FIPV) und dem Katzenherpesvirus (FHV-1). CRFK-Zellen sind gegenüber verschiedenen Katzenviren hochgradig empfänglich, was sie für die Impfstoffentwicklung und virologische Assays unentbehrlich macht. So werden diese Zellen beispielsweise bei der Herstellung und Prüfung von attenuierten Lebendimpfstoffen wie den FVRCP-Impfstoffen eingesetzt, die vor Katzenrhinotracheitis, Calicivirus und Panleukopenie schützen. Die Rolle der Zelllinie in Studien zur Virusreplikation hat wichtige Erkenntnisse über die Wechselwirkungen zwischen Wirt und Virus sowie über virusinduzierte zytopathische Effekte wie die Bildung von Synzytien und Veränderungen der Zellmorphologie geliefert.

Jüngste Forschungsergebnisse haben Herausforderungen bei der Verwendung von CRFK-Zellen für die Impfstoffentwicklung aufgezeigt, die auf Kontaminationsrisiken durch endogene Retroviren (ERVs) zurückzuführen sind. Insbesondere können CRFK-Zellen durch Rekombinationsereignisse das infektiöse RD-114-Virus, ein endogenes Retrovirus der Katze, produzieren. Um diesen Sicherheitsbedenken Rechnung zu tragen, wurden Genom-Editierungstechnologien wie TALENs eingesetzt, um die env-Gene der RD-114-verwandten Sequenzen auszuschalten und so das Risiko einer ERV-Kontamination bei der Impfstoffherstellung zu verringern. Diese Modifikationen beeinträchtigen die Lebensfähigkeit der CRFK-Zellen nicht, und die gentechnisch veränderten RDKO_CRFK-Zellen weisen verbesserte Sicherheitsprofile für den Einsatz bei der Herstellung von Biologika auf.

Darüber hinaus haben Transkriptom-Analysen von CRFK-Zellen deren unterschiedliche Genexpressionsprofile als Reaktion auf Virusinfektionen aufgezeigt. Bei einer Infektion mit FIPV regulieren CRFK-Zellen verschiedene immunbezogene Signalwege hoch, darunter die Toll-like-Rezeptor-Signalwege, MAPK- und JAK-STAT-Signalwege, während sie gleichzeitig eine signifikante Herunterregulierung von Signalwegen zeigen, die an der neuronalen und zellulären Organisation beteiligt sind. Diese Expressionsveränderungen spiegeln die in Epithelzellen aktivierten angeborenen Immunantworten wider und verdeutlichen Unterschiede im Vergleich zu primären Immunzellen wie Makrophagen, die unter ähnlichen Bedingungen unterschiedliche Wirtsreaktionen zeigen. Solche Erkenntnisse unterstreichen den Nutzen von CRFK-Zellen bei der Modellierung von Wirts-Pathogen-Interaktionen im Frühstadium und bei der Bewertung antiviraler Strategien.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung