CRFK

يُعد خط الخلايا CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) نموذجًا راسخًا مشتقًا من قشرة الكلية لجنين قطط طبيعي. ويستخدم على نطاق واسع في أبحاث علم الفيروسات، لا سيما لدراسة فيروسات القطط مثل فيروس التهاب الصفاق المعدي للقطط (FIPV) وفيروس الهربس القططي (FHV-1). تتميز خلايا CRFK بقدرة عالية على استقبال فيروسات القطط المختلفة، مما يجعلها ذات قيمة لا تقدر بثمن في تطوير اللقاحات وإجراء الاختبارات الفيروسية. على سبيل المثال، تُستخدم هذه الخلايا في إنتاج واختبار اللقاحات الحية المُخففة، مثل لقاحات FVRCP، التي توفر الحماية من التهاب الأنف والقصبة الهوائية لدى القطط، وفيروس الكاليسي، ونقص الكريات البيضاء الشامل. وقد كشف دور خط الخلايا هذا في دراسات تكاثر الفيروسات عن رؤى أساسية حول التفاعلات بين المضيف والفيروس والتأثيرات الخلوية المرضية التي يسببها الفيروس، مثل تكوين الخلايا المتحدّة والتغيرات في الشكل الخلوي.

وقد سلطت الأبحاث الحديثة الضوء على التحديات المرتبطة باستخدام خلايا CRFK في تطوير اللقاحات بسبب مخاطر التلوث التي تشكلها الفيروسات القهقرية الذاتية (ERVs). وعلى وجه التحديد، يمكن لخلايا CRFK إنتاج فيروس RD-114 المعدي، وهو فيروس ريتروفي داخلي المنشأ يصيب القطط، من خلال عمليات إعادة التركيب الجيني. ولمعالجة هذه المخاوف المتعلقة بالسلامة، تم استخدام تقنيات تعديل الجينوم مثل TALENs لإزالة الجينات env من التسلسلات المرتبطة بفيروس RD-114، مما يقلل من خطر التلوث بالفيروسات الرجعية الداخلية (ERVs) في إنتاج اللقاحات. لا تؤثر هذه التعديلات سلبًا على قابلية خلايا CRFK للبقاء، وقد أظهرت خلايا RDKO_CRFK المعدلة وراثيًا ملامح أمان محسنة للاستخدام في تصنيع المنتجات البيولوجية.

علاوة على ذلك، أظهرت التحليلات النسخومية لخلايا CRFK أنماطًا متباينة في التعبير الجيني استجابةً للعدوى الفيروسية. عند الإصابة بفيروس FIPV، تعمل خلايا CRFK على زيادة تنظيم مسارات مختلفة مرتبطة بالمناعة، بما في ذلك إشارات مستقبلات Toll-like ومسارات MAPK وJAK-STAT، بينما تُظهر في الوقت نفسه انخفاضًا ملحوظًا في تنظيم المسارات المرتبطة بالتنظيم العصبي والخلوي. تعكس هذه التغيرات في التعبير الاستجابات المناعية الفطرية التي يتم تنشيطها في الخلايا الظهارية وتسلط الضوء على الاختلافات مقارنةً بالخلايا المناعية الأولية، مثل البلاعم، التي تُظهر استجابات متميزة للمضيف في ظل ظروف مماثلة. وتؤكد هذه النتائج فائدة خلايا CRFK في نمذجة التفاعلات بين المضيف ومسببات الأمراض في المراحل المبكرة وتقييم الاستراتيجيات المضادة للفيروسات.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان