CRFK

Linia komórkowa CRFK (Crandell-Rees Feline Kidney) stanowi uznany model wyhodowany z kory nerkowej prawidłowego embrionu kota. Jest ona szeroko stosowana w badaniach wirusologicznych, zwłaszcza w badaniach nad wirusami kotów, takimi jak wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów (FIPV) oraz herpeswirus kotów (FHV-1). Komórki CRFK charakteryzują się wysoką podatnością na różne wirusy kotów, co sprawia, że są nieocenione w opracowywaniu szczepionek i testach wirusologicznych. Na przykład komórki te są wykorzystywane do produkcji i testowania żywych szczepionek atenuowanych, takich jak szczepionki FVRCP, które chronią przed kocim zapaleniem nosa i tchawicy, kaliciwirusem oraz panleukopenią. Rola tej linii komórkowej w badaniach nad replikacją wirusów dostarczyła kluczowych informacji na temat interakcji między gospodarzem a wirusem oraz wywoływanych przez wirusy efektów cytopatycznych, takich jak tworzenie syncytium i zmiany w morfologii komórek.

Najnowsze badania podkreśliły wyzwania związane z wykorzystaniem komórek CRFK do opracowywania szczepionek ze względu na ryzyko zanieczyszczenia stwarzane przez endogenne retrowirusy (ERV). W szczególności komórki CRFK mogą wytwarzać zakaźny wirus RD-114, endogenny retrowirus kotów, w wyniku procesów rekombinacji. Aby rozwiązać te problemy związane z bezpieczeństwem, zastosowano technologie edycji genomu, takie jak TALEN, w celu wyłączenia genów env sekwencji powiązanych z RD-114, co zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia ERV podczas produkcji szczepionek. Modyfikacje te nie wpływają negatywnie na żywotność komórek CRFK, a zmodyfikowane komórki RDKO_CRFK wykazały lepsze profile bezpieczeństwa w zastosowaniu do produkcji leków biologicznych.

Ponadto analizy transkryptomiczne komórek CRFK wykazały ich zróżnicowane profile ekspresji genów w odpowiedzi na infekcje wirusowe. Po zakażeniu wirusem FIPV komórki CRFK zwiększają aktywność różnych szlaków związanych z odpornością, w tym szlaków sygnałowych receptorów Toll-podobnych, MAPK i JAK-STAT, wykazując jednocześnie znaczną redukcję aktywności szlaków związanych z organizacją neuronową i komórkową. Te zmiany w ekspresji odzwierciedlają wrodzone reakcje immunologiczne aktywowane w komórkach nabłonkowych i podkreślają różnice w porównaniu z pierwotnymi komórkami odpornościowymi, takimi jak makrofagi, które wykazują odmienne reakcje gospodarza w podobnych warunkach. Takie ustalenia podkreślają przydatność komórek CRFK w modelowaniu wczesnych etapów interakcji między gospodarzem a patogenem oraz w ocenie strategii przeciwwirusowych.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym