PLAT-E

Plat-E (Platinum-E), insan embriyonik böbrek 293T hücre hattından geliştirilmiş bir retrovirüs paketleme hücre hattıdır. Yüksek titreli, ekotropik retrovirüslerin geçici üretimi için kararlı ve verimli bir sistem sağlamak üzere geliştirilmiştir. Hücre hattı, viral yapısal genlerin (gag-pol ve env) ekspresyonunun, 293T hücrelerinde geleneksel MuLV uzun terminal tekrarı (LTR) promotöründen önemli ölçüde daha güçlü olan insan EF1α promotörü tarafından yönlendirildiği yeni paketleme yapıları kullanılarak oluşturulmuştur. Bu tasarım, sağlam transkripsiyon aktivitesini garanti eder ve verimli retrovirüs montajı ve paketlemesi için gerekli olan viral bileşenlerin yüksek seviyede üretimini destekler.

Plat-E hücreleri, viral genleri iç ribozom giriş bölgeleri (IRES) aracılığıyla antibiyotik direnç belirteçlerine bağlayan pEnv-IRES-puror ve pGag-pol-IRES-bsr yapılarının sıralı ve stabil transfeksiyonu yoluyla üretilmiştir. Bu konfigürasyon, yalnızca temel viral genleri eksprese eden hücrelerin antibiyotik direnci kazanmasını garanti eder ve böylece yüksek ekspresyonlu alt klonların seçilmesine olanak tanır. Ortaya çıkan Plat-E hattı, puromisin ve blasticidin ile çift seleksiyon altında kültürlendiğinde, en az dört ay boyunca mililitre başına 1 × 10⁷ enfeksiyöz birime kadar titreye sahip retrovirüsleri tutarlı bir şekilde üretir. Northern blot, ters transkriptaz aktivitesi ve akış sitometrisi analizleri, Plat-E'nin Bosc23 ve Phoenix-E gibi önceki paketleme hatlarına göre önemli ölçüde daha yüksek gag-pol ve env ekspresyonu sergilediğini doğrulamıştır.

Plat-E'nin mimarisi, paketleme yapılarını viral yapısal genlerin yalnızca gerekli kodlama bölgeleriyle sınırlayarak ve bunları farklı plazmidlere ayırarak replikasyon yeteneğine sahip retrovirüs (RCR) oluşumu riskini en aza indirir. Bu tasarım, RCR üretmek için en az üç rekombinasyon olayı gerektirir, böylece biyogüvenliği artırır. Plat-E, T hücreleri ve mast hücreleri gibi birincil hücrelerin verimli transdüksiyonu dahil olmak üzere gen transferi uygulamalarında yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Performansı ve uzun vadeli stabilitesi, onu hem temel araştırma hem de preklinik gen terapisi geliştirmelerinde retroviral vektör üretimi için güvenilir bir platform haline getirmektedir.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın