PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) เป็นสายพันธุ์เซลล์บรรจุไวรัสย้อนกลับ (retrovirus) ที่ถูกดัดแปลงมาจากเซลล์ไตของตัวอ่อนมนุษย์สายพันธุ์ 293T (human embryonic kidney 293T) สายพันธุ์นี้ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อให้ระบบที่มีความเสถียรและมีประสิทธิภาพสำหรับการผลิตไวรัสย้อนกลับชนิด ecotropic ในปริมาณสูงแบบชั่วคราว สายพันธุ์เซลล์ถูกสร้างขึ้นโดยใช้โครงสร้างบรรจุภัณฑ์ใหม่ ซึ่งการแสดงออกของยีนโครงสร้างไวรัส - gag-pol และ env - ถูกควบคุมโดยโปรโมเตอร์ EF1α ของมนุษย์ ซึ่งมีประสิทธิภาพมากกว่าโปรโมเตอร์ซ้ำปลายยาว (LTR) ของ MuLV แบบดั้งเดิมอย่างมากในเซลล์ 293T การออกแบบนี้ช่วยให้มั่นใจในกิจกรรมการถอดรหัสที่แข็งแกร่งและสนับสนุนการผลิตส่วนประกอบไวรัสในระดับสูงที่จำเป็นสำหรับการประกอบและบรรจุหีบห่อเรโทรไวรัสอย่างมีประสิทธิภาพ

เซลล์ Plat-E ถูกสร้างขึ้นผ่านการถ่ายโอนยีนส์แบบคงที่ต่อเนื่องของโครงสร้าง pEnv-IRES-puror และ pGag-pol-IRES-bsr ซึ่งเชื่อมโยงยีนไวรัสกับตัวบ่งชี้ความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะผ่านตำแหน่งการเข้าของไรโบโซมภายใน (IRES) การกำหนดค่านี้รับประกันว่าเฉพาะเซลล์ที่แสดงออกยีนไวรัสที่จำเป็นเท่านั้นที่จะได้รับความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะ ทำให้สามารถคัดเลือกซับโคลนที่มีการแสดงออกสูงได้ สายพันธุ์ Plat-E ที่ได้สามารถผลิตไวรัสเรโทรที่มีค่าความเข้มข้นสูงสุดถึง 1 × 10⁷ หน่วยติดเชื้อต่อมิลลิลิตรได้อย่างสม่ำเสมอเป็นเวลาอย่างน้อยสี่เดือน เมื่อเพาะเลี้ยงภายใต้การคัดเลือกคู่ด้วยพูโรไมซินและบลาสติซิดิน การวิเคราะห์ด้วย Northern blot, กิจกรรมของเอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเตส และการวัดด้วยโฟลไซโตเมทรี ยืนยันว่า Plat-E แสดงการแสดงออกของยีน gag-pol และ env สูงกว่าสายพันธุ์บรรจุไวรัสก่อนหน้า เช่น Bosc23 และ Phoenix-E อย่างมีนัยสำคัญ

สถาปัตยกรรมของ Plat-E ช่วยลดความเสี่ยงในการสร้างไวรัสย้อนกลับที่สามารถจำลองตัวเองได้ (RCR) โดยจำกัดโครงสร้างการบรรจุให้เฉพาะบริเวณรหัสพันธุกรรมที่จำเป็นของยีนโครงสร้างของไวรัสเท่านั้น และแยกออกเป็นพลาสมิดต่างกัน การออกแบบนี้ต้องการเหตุการณ์การรวมตัวกันใหม่ (recombination) อย่างน้อยสามครั้งเพื่อสร้าง RCR ซึ่งช่วยเพิ่มความปลอดภัยทางชีวภาพ Plat-E ได้พิสูจน์แล้วว่ามีประโยชน์ในการประยุกต์ใช้การถ่ายโอนยีน รวมถึงการถ่ายทอดที่มีประสิทธิภาพในเซลล์ต้นกำเนิด เช่น เซลล์ T และเซลล์มาสต์ ประสิทธิภาพและความเสถียรในระยะยาวทำให้เป็นแพลตฟอร์มที่เชื่อถือได้สำหรับการผลิตเวกเตอร์เรโทรไวรัสทั้งในการวิจัยพื้นฐานและการพัฒนาการบำบัดด้วยยีนก่อนคลินิก

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.