PLAT-E

Το Plat-E (Platinum-E) είναι μια κυτταρική σειρά συσκευασίας ρετροϊών που έχει κατασκευαστεί με βάση τα ανθρώπινα εμβρυϊκά νεφρικά κύτταρα 293T. Αναπτύχθηκε με σκοπό να προσφέρει ένα σταθερό και αποδοτικό σύστημα για την προσωρινή παραγωγή ρετροϊών υψηλού τίτλου, του τύπου ecotropic. Η κυτταρική σειρά κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας καινοτόμα κατασκευάσματα συσκευασίας, στα οποία η έκφραση των δομικών γονιδίων του ιού - gag-pol και env - καθοδηγείται από τον ανθρώπινο προαγωγέα EF1α, ο οποίος είναι σημαντικά πιο ισχυρός στα κύτταρα 293T από τον συμβατικό προαγωγέα MuLV long terminal repeat (LTR). Αυτός ο σχεδιασμός εξασφαλίζει ισχυρή μεταγραφική δραστηριότητα και υποστηρίζει την παραγωγή υψηλού επιπέδου των ιικών συστατικών που είναι απαραίτητα για την αποτελεσματική συναρμολόγηση και συσκευασία του ρετροϊού.

Τα κύτταρα Plat-E δημιουργήθηκαν μέσω διαδοχικής σταθερής μεταμόλυνσης των κατασκευασμάτων pEnv-IRES-puror και pGag-pol-IRES-bsr, τα οποία συνδέουν τα ιικά γονίδια με δείκτες αντοχής στα αντιβιοτικά μέσω εσωτερικών θέσεων εισόδου στο ριβοσώμα (IRES). Αυτή η διαμόρφωση εγγυάται ότι μόνο τα κύτταρα που εκφράζουν τα απαραίτητα ιικά γονίδια αποκτούν επίσης αντοχή στα αντιβιοτικά, επιτρέποντας την επιλογή υποκλώνων υψηλής έκφρασης. Η προκύπτουσα σειρά Plat-E παράγει σταθερά ρετροϊούς με τίτλους έως 1 × 10⁷ μονάδες μόλυνσης ανά χιλιοστόλιτρο για τουλάχιστον τέσσερις μήνες όταν καλλιεργείται υπό διπλή επιλογή με πουρομυκίνη και βλαστικιδίνη. Αναλύσεις Northern blot, δραστηριότητας αντίστροφης μεταγραφάσης και κυτταρομετρίας ροής επιβεβαίωσαν ότι το Plat-E εμφανίζει σημαντικά υψηλότερη έκφραση gag-pol και env σε σύγκριση με προηγούμενες σειρές συσκευασίας όπως το Bosc23 και το Phoenix-E.

Η αρχιτεκτονική του Plat-E ελαχιστοποιεί τον κίνδυνο δημιουργίας ρετροϊού ικανό για αναπαραγωγή (RCR) περιορίζοντας τα κατασκευάσματα συσκευασίας μόνο στις απαραίτητες κωδικοποιητικές περιοχές των δομικών γονιδίων του ιού και διαχωρίζοντάς τα σε διαφορετικά πλασμίδια. Αυτός ο σχεδιασμός απαιτεί τουλάχιστον τρία γεγονότα ανασυνδυασμού για την παραγωγή RCR, ενισχύοντας έτσι τη βιοασφάλεια. Το Plat-E έχει αποδειχθεί χρήσιμο σε εφαρμογές μεταφοράς γονιδίων, συμπεριλαμβανομένης της αποτελεσματικής μεταγωγής πρωτογενών κυττάρων, όπως τα Τ κύτταρα και τα μαστοκύτταρα. Η απόδοσή του και η μακροπρόθεσμη σταθερότητά του το καθιστούν μια αξιόπιστη πλατφόρμα για την παραγωγή ρετροϊικών φορέων τόσο στη βασική έρευνα όσο και στην προκλινική ανάπτυξη γονιδιακής θεραπείας.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης