PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) est une lignée cellulaire d’encapsidation de rétrovirus dérivée de la lignée cellulaire rénale embryonnaire humaine 293T. Elle a été mise au point afin de fournir un système stable et efficace pour la production transitoire de rétrovirus écotropes à titre élevé. La lignée cellulaire a été construite à l’aide de nouvelles constructions d’encapsidation dans lesquelles l’expression des gènes structuraux viraux — gag-pol et env — est régulée par le promoteur EF1α humain, qui est nettement plus puissant dans les cellules 293T que le promoteur conventionnel de la répétition terminale longue (LTR) du MuLV. Cette conception garantit une activité transcriptionnelle robuste et permet une production à haut débit des composants viraux nécessaires à l’assemblage et à l’encapsidation efficaces des rétrovirus.

Les cellules Plat-E ont été générées par transfection stable séquentielle des constructions pEnv-IRES-puror et pGag-pol-IRES-bsr, qui relient les gènes viraux à des marqueurs de résistance aux antibiotiques via des sites d’entrée ribosomique internes (IRES). Cette configuration garantit que seules les cellules exprimant les gènes viraux essentiels acquièrent également une résistance aux antibiotiques, ce qui permet la sélection de sous-clones à forte expression. La lignée Plat-E ainsi obtenue produit de manière constante des rétrovirus dont les titres atteignent jusqu’à 1 × 10⁷ unités infectieuses par millilitre pendant au moins quatre mois lorsqu’elle est cultivée sous double sélection avec de la puromycine et de la blasticidine. Des analyses par Northern blot, d’activité de la transcriptase inverse et par cytométrie en flux ont confirmé que Plat-E présente une expression de gag-pol et d’env significativement plus élevée que les lignées d’encapsidation précédentes telles que Bosc23 et Phoenix-E.

L’architecture de Plat-E minimise le risque de génération de rétrovirus compétents pour la réplication (RCR) en limitant les constructions d’encapsidation aux seules régions codantes nécessaires des gènes structuraux viraux et en les séparant sur des plasmides distincts. Cette conception nécessite au moins trois événements de recombinaison pour produire un RCR, ce qui renforce la biosécurité. Plat-E s’est avérée utile dans les applications de transfert de gènes, notamment pour la transduction efficace de cellules primaires telles que les lymphocytes T et les mastocytes. Ses performances et sa stabilité à long terme en font une plateforme fiable pour la production de vecteurs rétroviraux, tant dans la recherche fondamentale que dans le développement préclinique de la thérapie génique.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.