PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) هو خط خلوي لتعبئة الفيروسات القهقرية تم هندسته انطلاقاً من الخلايا الجنينية البشرية 293T. وقد تم تطويره لتوفير نظام مستقر وفعال للإنتاج المؤقت للفيروسات القهقرية ذات التتر العالي والموجهة نحو الخلايا. تم إنشاء خط الخلايا باستخدام تركيبات تغليف جديدة يتم فيها تحفيز التعبير عن الجينات الهيكلية الفيروسية - gag-pol و env - بواسطة محفز EF1α البشري، الذي يعتبر أقوى بكثير في خلايا 293T من محفز التكرار الطرفي الطويل (LTR) التقليدي لفيروس MuLV. يضمن هذا التصميم نشاطًا نسخيًا قويًا ويدعم الإنتاج عالي المستوى للمكونات الفيروسية الضرورية لتجميع وتغليف الفيروسات القهقرية بكفاءة.

تم إنتاج خلايا Plat-E من خلال نقل جيني متسلسل ومستقر لتركيبات pEnv-IRES-puror و pGag-pol-IRES-bsr، التي تربط الجينات الفيروسية بعلامات مقاومة المضادات الحيوية عبر مواقع الدخول الداخلية للريبوسوم (IRES). يضمن هذا التكوين أن الخلايا التي تعبر عن الجينات الفيروسية الأساسية هي وحدها التي تكتسب أيضًا مقاومة للمضادات الحيوية، مما يسمح باختيار سلالات فرعية عالية التعبير. تنتج سلالة Plat-E الناتجة بشكل ثابت فيروسات رجعية بتراكيز تصل إلى 1 × 10⁷ وحدة معدية لكل ملليلتر لمدة أربعة أشهر على الأقل عند زراعتها تحت اختيار مزدوج باستخدام البوروميسين والبلستيسيدين. أكدت تحليلات Northern blot ونشاط الإنزيم العكسي للنسخ والتحليل الخلوي التدفقي أن Plat-E تُظهر تعبيرًا أعلى بكثير عن gag-pol و env مقارنة بسلالات التعبئة السابقة مثل Bosc23 و Phoenix-E.

تقلل بنية Plat-E من مخاطر توليد فيروسات رجعية قادرة على التكاثر (RCR) عن طريق قصر تركيبات التعبئة على المناطق الترميزية الضرورية فقط من الجينات الهيكلية الفيروسية وفصلها إلى بلازميدات مختلفة. يتطلب هذا التصميم ما لا يقل عن ثلاث عمليات إعادة تركيب لإنتاج RCR، مما يعزز السلامة البيولوجية. أثبت Plat-E فائدته في تطبيقات نقل الجينات، بما في ذلك التحويل الفعال للخلايا الأولية مثل الخلايا التائية والخلايا البدينة. ويجعله أدائه واستقراره على المدى الطويل منصة موثوقة لإنتاج ناقلات الفيروسات القهقرية في كل من الأبحاث الأساسية وتطوير العلاج الجيني قبل السريري.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان