PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) je buněčná linie pro balení retrovirů, která byla vyvinuta na bázi lidských embryonálních ledvinových buněk 293T. Byla vyvinuta s cílem poskytnout stabilní a účinný systém pro přechodnou produkci ekotropních retrovirů s vysokým titrem. Buněčná linie byla vytvořena pomocí nových konstrukcí pro balení, ve kterých je exprese virových strukturálních genů – gag-pol a env – řízena lidským promotorem EF1α, který je v buňkách 293T podstatně účinnější než konvenční promotor MuLV s dlouhým terminálním opakováním (LTR). Tento design zajišťuje robustní transkripční aktivitu a podporuje vysokou úroveň produkce virových komponent nezbytných pro účinnou sestavu a balení retrovirů.

Buňky Plat-E byly vygenerovány postupnou stabilní transfekcí konstruktů pEnv-IRES-puror a pGag-pol-IRES-bsr, které propojují virové geny s markery antibiotické rezistence prostřednictvím interních ribozomových vstupních míst (IRES). Tato konfigurace zaručuje, že pouze buňky exprimující esenciální virové geny získají také antibiotickou rezistenci, což umožňuje selekci subklonů s vysokou expresí. Výsledná linie Plat-E konzistentně produkuje retroviry s titry až 1 × 10⁷ infekčních jednotek na mililitr po dobu nejméně čtyř měsíců při kultivaci v duální selekci s puromycinem a blasticidinem. Analýzy Northern blot, aktivity reverzní transkriptázy a průtokové cytometrie potvrdily, že Plat-E vykazuje významně vyšší expresi gag-pol a env než předchozí balicí linie, jako jsou Bosc23 a Phoenix-E.

Architektura Plat-E minimalizuje riziko vzniku replikačně kompetentního retroviru (RCR) tím, že omezuje balicí konstrukty pouze na nezbytné kódující oblasti virových strukturálních genů a odděluje je na různé plazmidy. Tento design vyžaduje alespoň tři rekombinační události k produkci RCR, čímž zvyšuje biologickou bezpečnost. Plat-E se osvědčil v aplikacích genového přenosu, včetně účinné transdukce primárních buněk, jako jsou T buňky a žírné buňky. Jeho výkon a dlouhodobá stabilita z něj činí spolehlivou platformu pro produkci retrovirových vektorů jak v základním výzkumu, tak v předklinickém vývoji genové terapie.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení