PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) on retrovirusten pakkaussolulinja, joka on kehitetty ihmisen alkion munuaisperäisistä 293T-soluista. Se on kehitetty tarjoamaan vakaa ja tehokas järjestelmä korkeatitteristen, ekotrooppisten retrovirusten tilapäiseen tuotantoon. Solulinja rakennettiin käyttämällä uusia pakkausrakenteita, joissa viruksen rakennegeenien – gag-pol ja env – ilmentymistä ohjaa ihmisen EF1α-promoottori, joka on huomattavasti tehokkaampi 293T-soluissa kuin perinteinen MuLV:n pitkä terminaalinen toistojakso (LTR) -promoottori. Tämä rakenne takaa vahvan transkriptioaktiivisuuden ja tukee tehokkaaseen retroviruksen kokoamiseen ja pakkaamiseen tarvittavien viruskomponenttien korkeatasoista tuotantoa.

Plat-E-solut tuotettiin peräkkäisellä vakaalla transfektiolla pEnv-IRES-puror- ja pGag-pol-IRES-bsr-rakenteilla, jotka yhdistävät virusgeenit antibioottiresistenssimarkkereihin sisäisten ribosomien sisäänpääsykohdien (IRES) kautta. Tämä kokoonpano takaa, että vain solut, jotka ilmentävät välttämättömiä virusgeenejä, saavat myös antibioottiresistenssin, mikä mahdollistaa korkean ilmentymistason alikloonien valinnan. Tuloksena oleva Plat-E-linja tuottaa johdonmukaisesti retroviruksia, joiden tiitteri on jopa 1 × 10⁷ infektiivistä yksikköä millilitrassa vähintään neljän kuukauden ajan, kun niitä viljellään puromysiinin ja blasticidiinin kaksoisseulonnassa. Northern blot-, käänteiskopioijaentsyymiaktiivisuus- ja virtaussytometria-analyysit vahvistivat, että Plat-E:llä on merkittävästi korkeampi gag-pol- ja env-ilmentyminen kuin edeltäjillä, kuten Bosc23- ja Phoenix-E-pakkauslinjoilla.

Plat-E:n rakenne minimoi replikaatiokykyisen retroviruksen (RCR) syntymisen riskin rajoittamalla pakkauskonstruktit vain viruksen rakennegeenien välttämättömiin koodausalueisiin ja erottamalla ne eri plasmideihin. Tämä rakenne vaatii vähintään kolme rekombinaatiotapahtumaa RCR:n tuottamiseksi, mikä parantaa bioturvallisuutta. Plat-E on osoittautunut hyödylliseksi geeninsiirtosovelluksissa, mukaan lukien T-solujen ja syöttösolujen kaltaisten primaarisolujen tehokas transduktio. Sen suorituskyky ja pitkäaikainen stabiilius tekevät siitä luotettavan alustan retrovirusvektoreiden tuotantoon sekä perustutkimuksessa että prekliinisessä geeniterapian kehityksessä.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa