PLAT-E

Plat-E（Platinum-E）是一种基于人胚胎肾293T细胞构建的逆转录病毒包装细胞系。该细胞系的开发旨在提供一个稳定且高效的系统，用于瞬时生产高滴度的亲肠道逆转录病毒。 该细胞系采用新型包装构建体构建，其中病毒结构基因（gag-pol 和 env）的表达由人类 EF1α 启动子驱动，该启动子在 293T 细胞中的活性远高于传统的 MuLV 长末端重复序列（LTR）启动子。这种设计确保了强大的转录活性，并支持高效逆转录病毒组装和包装所需病毒组分的高水平生产。

Plat-E细胞是通过依次稳定转染pEnv-IRES-puror和pGag-pol-IRES-bsr构建体获得的，这些构建体通过内部核糖体进入位点（IRES）将病毒基因与抗生素耐药性标记物相连。这种配置确保只有表达必需病毒基因的细胞才会获得抗生素耐药性，从而能够筛选出高表达亚克隆。 在嘌呤霉素和布拉西定双重筛选条件下培养时，所得 Plat-E 细胞系在至少四个月内能持续产生滴度高达 1 × 10⁷ 感染单位/毫升的逆转录病毒。Northern 印迹、逆转录酶活性及流式细胞术分析证实，与 Bosc23 和 Phoenix-E 等前代包装细胞系相比，Plat-E 表现出显著更高的 gag-pol 和 env 表达水平。

Plat-E 的构建设计通过将包装构建体仅限于病毒结构基因的必要编码区，并将其分离到不同的质粒上，从而最大限度地降低了产生具有复制能力的逆转录病毒（RCR）的风险。这种设计需要至少三次重组事件才能产生 RCR，从而提高了生物安全性。 Plat-E 已在基因转移应用中证明其有效性，包括对 T 细胞和肥大细胞等原代细胞的高效转导。其性能和长期稳定性使其成为基础研究和临床前基因治疗开发中生产逆转录病毒载体的可靠平台。

37°C, 5%_CO2, 加湿环境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。

为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。

有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。