PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) е клетъчна линия за опаковане на ретровируси, създадена на базата на човешки ембрионални бъбречни клетки 293T. Тя е разработена с цел да предостави стабилна и ефективна система за временно производство на екотропни ретровируси с висок титър. Клетъчната линия е конструирана с помощта на нови конструкции за опаковане, при които експресията на вирусните структурни гени – gag-pol и env – се управлява от човешкия EF1α промотор, който е значително по-мощен в 293T клетките, отколкото конвенционалният MuLV промотор с дълъг терминален повторен елемент (LTR). Този дизайн осигурява стабилна транскрипционна активност и поддържа високо ниво на производство на вирусните компоненти, необходими за ефективното сглобяване и опаковане на ретровируса.

Клетките Plat-E бяха генерирани чрез последователна стабилна трансфекция на конструкциите pEnv-IRES-puror и pGag-pol-IRES-bsr, които свързват вирусните гени с маркери за антибиотична резистентност чрез вътрешни сайтове за влизане в рибозомата (IRES). Тази конфигурация гарантира, че само клетките, експресиращи есенциалните вирусни гени, придобиват антибиотична резистентност, което позволява селекция на субклони с висока експресия. Получената линия Plat-E последователно произвежда ретровируси с титри до 1 × 10⁷ инфекциозни единици на милилитър в продължение на поне четири месеца, когато се култивира при двойна селекция с пуромицин и бластицидин. Анализи чрез Northern blot, обратна транскриптазна активност и проточна цитометрия потвърдиха, че Plat-E проявява значително по-висока експресия на gag-pol и env в сравнение с предшестващи линии за опаковане като Bosc23 и Phoenix-E.

Архитектурата на Plat-E минимизира риска от генериране на ретровирус, способен на репликация (RCR), като ограничава опаковъчните конструкции само до необходимите кодиращи региони на вирусните структурни гени и ги разделя на различни плазмиди. Този дизайн изисква поне три рекомбинационни събития за производството на RCR, като по този начин повишава биологичната безопасност. Plat-E се е доказал като полезен в приложения за генен трансфер, включително ефективна трансдукция на първични клетки като Т-клетки и мастоцити. Неговата производителност и дългосрочна стабилност го правят надеждна платформа за производство на ретровирусни вектори както в фундаменталните изследвания, така и в предклиничното разработване на генна терапия.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация