PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) adalah lini sel pengemas retrovirus yang direkayasa dari sel ginjal embrio manusia 293T. Lini sel ini dikembangkan untuk menyediakan sistem yang stabil dan efisien guna produksi sementara retrovirus ekotropik dengan titer tinggi. Baris sel ini dibangun menggunakan konstruksi pengemasan baru di mana ekspresi gen struktural virus - gag-pol dan env - didorong oleh promotor EF1α manusia, yang secara substansial lebih kuat pada sel 293T daripada promotor long terminal repeat (LTR) MuLV konvensional. Desain ini memastikan aktivitas transkripsi yang kuat dan mendukung produksi tingkat tinggi komponen virus yang diperlukan untuk perakitan dan pengemasan retrovirus yang efisien.

Sel Plat-E dihasilkan melalui transfeksi stabil berurutan dari konstruksi pEnv-IRES-puror dan pGag-pol-IRES-bsr, yang menghubungkan gen-gen virus dengan penanda resistensi antibiotik melalui situs masuk ribosom internal (IRES). Konfigurasi ini menjamin bahwa hanya sel yang mengekspresikan gen-gen virus esensial yang juga memperoleh resistensi antibiotik, sehingga memungkinkan seleksi subklon dengan ekspresi tinggi. Garis sel Plat-E yang dihasilkan secara konsisten menghasilkan retrovirus dengan titer hingga 1 × 10⁷ unit infeksius per mililiter selama setidaknya empat bulan saat dikultur dengan seleksi ganda menggunakan puromisin dan blasticidin. Analisis Northern blot, aktivitas reverse transcriptase, dan sitometri aliran mengonfirmasi bahwa Plat-E menunjukkan ekspresi gag-pol dan env yang jauh lebih tinggi dibandingkan garis pengemasan pendahulunya seperti Bosc23 dan Phoenix-E.

Arsitektur Plat-E meminimalkan risiko pembentukan retrovirus yang mampu bereplikasi (RCR) dengan membatasi konstruksi pengemasan hanya pada daerah pengkodean yang diperlukan dari gen struktural virus dan memisahkannya ke dalam plasmid yang berbeda. Desain ini memerlukan setidaknya tiga peristiwa rekombinasi untuk menghasilkan RCR, sehingga meningkatkan keamanan biologis. Plat-E telah terbukti berguna dalam aplikasi transfer gen, termasuk transduksi yang efisien pada sel primer seperti sel T dan sel mast. Kinerja dan stabilitas jangka panjangnya menjadikannya platform yang andal untuk produksi vektor retrovirus baik dalam penelitian dasar maupun pengembangan terapi gen praklinis.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami