PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) on retroviiruste pakkimiseks mõeldud rakuliin, mis on loodud inimese embrüonaalsete neerurakkude 293T rakuliini baasil. See töötati välja, et pakkuda stabiilset ja tõhusat süsteemi kõrge tiitriga ekotroopsete retroviiruste ajutiseks tootmiseks. Rakuliin konstrueeriti uudsete pakkimiskonstruktide abil, milles viiruse struktuurigeenide – gag-pol ja env – ekspressiooni juhib inimese EF1α promootor, mis on 293T-rakkudes oluliselt tugevam kui tavapärane MuLV pikk terminaalne kordus (LTR) promootor. Selline disain tagab tugeva transkriptsioonilise aktiivsuse ja toetab retroviiruse tõhusaks kokkupanekuks ja pakkimiseks vajalike viiruskomponentide kõrgetasemelist tootmist.

Plat-E rakud loodi pEnv-IRES-puror ja pGag-pol-IRES-bsr konstruktide järjestikuse stabiilse transfektsiooni teel, mis ühendavad viirusgeenid antibiootikumiresistentsuse markeritega sisemiste ribosomaalsete sisenemiskohtade (IRES) kaudu. See konfiguratsioon tagab, et ainult olulisi viirusgeene ekspresseerivad rakud omandavad ka antibiootikumiresistentsuse, võimaldades kõrge ekspressiooniga subkloonide selektsiooni. Saadud Plat-E liin toodab järjepidevalt retroviiruseid tiitriga kuni 1 × 10⁷ nakkusohtlikku ühikut milliliitri kohta vähemalt nelja kuu jooksul, kui neid kasvatatakse puromütsiini ja blastitsidiini kahekomponentsel selektsioonil. Northern blot, pöördtranskriptaasi aktiivsuse ja voolutsütomeetria analüüsid kinnitasid, et Plat-E-l on märkimisväärselt kõrgem gag-pol ja env ekspressioon kui eelkäijatel, nagu Bosc23 ja Phoenix-E.

Plat-E arhitektuur minimeerib replikatsioonivõimelise retroviiruse (RCR) tekkimise riski, piirates pakkimiskonstruktsioone ainult viiruse struktuurigeenide vajalike kodeerivate piirkondadega ja eraldades need erinevatele plasmiididele. See disain nõuab RCR-i tootmiseks vähemalt kolme rekombinatsioonisündmust, parandades seeläbi bioloogilist ohutust. Plat-E on osutunud kasulikuks geenisiirde rakendustes, sealhulgas T-rakkude ja nuumrakkude tõhusas transduktsioonis. Selle toimivus ja pikaajaline stabiilsus teevad sellest usaldusväärse platvormi retroviirusvektorite tootmiseks nii alusuuringutes kui ka prekliinilises geeniteraapia arenduses.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest