PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) è una linea cellulare di impacchettamento retrovirale ottenuta a partire dalla linea cellulare renale embrionale umana 293T. È stata sviluppata per fornire un sistema stabile ed efficiente per la produzione transitoria di retrovirus ecotropici ad alto titolo. La linea cellulare è stata costruita utilizzando nuovi costrutti di impacchettamento in cui l'espressione dei geni strutturali virali - gag-pol ed env - è guidata dal promotore EF1α umano, che è sostanzialmente più potente nelle cellule 293T rispetto al promotore convenzionale a ripetizione terminale lunga (LTR) del MuLV. Questo design garantisce una robusta attività trascrizionale e supporta la produzione ad alto livello dei componenti virali necessari per l'efficiente assemblaggio e impacchettamento del retrovirus.

Le cellule Plat-E sono state generate tramite trasfezione stabile sequenziale dei costrutti pEnv-IRES-puror e pGag-pol-IRES-bsr, che collegano i geni virali a marcatori di resistenza agli antibiotici tramite siti interni di ingresso nel ribosoma (IRES). Questa configurazione garantisce che solo le cellule che esprimono i geni virali essenziali acquisiscano anche la resistenza agli antibiotici, consentendo la selezione di sottocloni ad alta espressione. La linea Plat-E risultante produce costantemente retrovirus con titoli fino a 1 × 10⁷ unità infettive per millilitro per almeno quattro mesi quando coltivata in doppia selezione con puromicina e blasticidina. Analisi Northern blot, dell'attività della trascrittasi inversa e di citometria a flusso hanno confermato che Plat-E mostra un'espressione di gag-pol ed env significativamente più elevata rispetto alle linee di confezionamento precedenti, come Bosc23 e Phoenix-E.

L'architettura di Plat-E riduce al minimo il rischio di generare retrovirus a capacità di replicazione (RCR) limitando i costrutti di packaging alle sole regioni codificanti necessarie dei geni strutturali virali e separandoli su plasmidi diversi. Questo design richiede almeno tre eventi di ricombinazione per produrre RCR, migliorando così la biosicurezza. Plat-E si è dimostrato utile nelle applicazioni di trasferimento genico, compresa l'efficiente trasduzione di cellule primarie come i linfociti T e i mastociti. Le sue prestazioni e la sua stabilità a lungo termine lo rendono una piattaforma affidabile per la produzione di vettori retrovirali sia nella ricerca di base che nello sviluppo preclinico della terapia genica.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia