PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) הוא קו תאים לאריזת רטרו-וירוסים, שהונדס על בסיס תאי כליה עובריים אנושיים מסוג 293T. הוא פותח במטרה לספק מערכת יציבה ויעילה לייצור זמני של רטרו-וירוסים אקוטרופיים בעלי טיטר גבוה. קו התאים נבנה באמצעות קונסטרוקטים חדשניים לאריזה, שבהם הביטוי של גנים מבניים נגיפיים - gag-pol ו-env - מונע על ידי הפרומוטור האנושי EF1α, שהוא חזק משמעותית בתאי 293T מאשר הפרומוטור המקובל של MuLV עם החזרה הסופית הארוכה (LTR). תכנון זה מבטיח פעילות תעתיקית חזקה ותומך בייצור ברמה גבוהה של רכיבים נגיפיים הנחוצים להרכבה ואריזה יעילות של רטרו-וירוסים.

תאי Plat-E נוצרו באמצעות טרנספקציה יציבה ורצופה של מבנים pEnv-IRES-puror ו-pGag-pol-IRES-bsr, המקשרים את הגנים הנגיפיים לסמני עמידות לאנטיביוטיקה באמצעות אתרי כניסה פנימיים לריבוזום (IRES). תצורה זו מבטיחה שרק תאים המבטאים את הגנים הנגיפיים החיוניים ירכשו גם עמידות לאנטיביוטיקה, מה שמאפשר בחירה של תת-קלונים בעלי ביטוי גבוה. קו ה-Plat-E שהתקבל מייצר באופן עקבי רטרו-וירוסים עם טיטר של עד 1 × 10⁷ יחידות מדבקות למיליליטר למשך ארבעה חודשים לפחות, כאשר הוא מתורבת תחת סלקציה כפולה עם פורומיצין ובליסטידין. ניתוחי Northern blot, פעילות טרנסקריפטאז הפוכה וציטומטריית זרימה אישרו כי Plat-E מפגין ביטוי gag-pol ו-env גבוה משמעותית בהשוואה לקווי אריזה קודמים כגון Bosc23 ו-Phoenix-E.

הארכיטקטורה של Plat-E ממזערת את הסיכון ליצירת רטרו-וירוס בעל יכולת שכפול (RCR) על ידי הגבלת מבני האריזה לאזורי הקידוד ההכרחיים בלבד של הגנים המבניים של הנגיף והפרדתם לפלסמידים שונים. תכנון זה דורש לפחות שלושה אירועי רקומבינציה כדי לייצר RCR, ובכך משפר את הבטיחות הביולוגית. Plat-E הוכיח את יעילותו ביישומים של העברת גנים, כולל העברה יעילה של תאים ראשוניים כגון תאי T ותאי שומן. ביצועיו ויציבותו לטווח ארוך הופכים אותו לפלטפורמה אמינה לייצור וקטורים רטרו-ויראליים הן במחקר בסיסי והן בפיתוח טיפול גנטי פרה-קליני.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו