PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) is een retrovirus-verpakkingscellijn die is ontwikkeld op basis van de menselijke embryonale niercel 293T. Deze cellijn is ontwikkeld om een stabiel en efficiënt systeem te bieden voor de tijdelijke productie van ecotrope retrovirussen met een hoge titer. De cellijn is geconstrueerd met behulp van nieuwe verpakkingsconstructen waarin de expressie van virale structurele genen – gag-pol en env – wordt aangestuurd door de menselijke EF1α-promotor, die in 293T-cellen aanzienlijk krachtiger is dan de conventionele MuLV long terminal repeat (LTR)-promotor. Dit ontwerp zorgt voor een robuuste transcriptieactiviteit en ondersteunt de productie op hoog niveau van virale componenten die nodig zijn voor een efficiënte assemblage en verpakking van retrovirussen.

Plat-E-cellen werden gegenereerd door middel van opeenvolgende stabiele transfectie van pEnv-IRES-puror- en pGag-pol-IRES-bsr-constructen, die de virale genen via interne ribosoom-toegangsplaatsen (IRES) koppelen aan antibiotica-resistentiemarkers. Deze configuratie garandeert dat alleen cellen die de essentiële virale genen tot expressie brengen ook antibioticaresistentie verwerven, waardoor selectie van subklonen met hoge expressie mogelijk is. De resulterende Plat-E-lijn produceert consistent retrovirussen met titers tot 1 × 10⁷ infectieuze eenheden per milliliter gedurende ten minste vier maanden bij kweek onder dubbele selectie met puromycine en blasticidine. Northern-blot-, reverse-transcriptase-activiteits- en flowcytometrieanalyses bevestigden dat Plat-E een significant hogere gag-pol- en env-expressie vertoont dan eerdere verpakkingslijnen zoals Bosc23 en Phoenix-E.

De architectuur van Plat-E minimaliseert het risico op het genereren van replicatiecompetente retrovirussen (RCR) door de verpakkingsconstructen te beperken tot alleen de noodzakelijke coderende regio's van de virale structuurgenen en deze te scheiden op verschillende plasmiden. Dit ontwerp vereist ten minste drie recombinatie-events om RCR te produceren, waardoor de bioveiligheid wordt verbeterd. Plat-E is nuttig gebleken bij genoverdrachtstoepassingen, waaronder efficiënte transductie van primaire cellen zoals T-cellen en mestcellen. De prestaties en langetermijnstabiliteit maken het een betrouwbaar platform voor de productie van retrovirale vectoren in zowel fundamenteel onderzoek als de preklinische ontwikkeling van gentherapie.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring