PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) er en retrovirus-pakkecellelinje som er utviklet på bakgrunn av den humane embryonale nyrecellelinjen 293T. Den ble utviklet for å gi et stabilt og effektivt system for midlertidig produksjon av ekotrope retrovirus med høy titer. Cellelinjen ble konstruert ved hjelp av nye pakkekonstruksjoner der uttrykket av virale strukturgener – gag-pol og env – drives av den humane EF1α-promotoren, som er betydelig kraftigere i 293T-celler enn den konvensjonelle MuLV-promotoren med lang terminal repetisjon (LTR). Denne utformingen sikrer robust transkripsjonsaktivitet og støtter høyt nivå av produksjon av virale komponenter som er nødvendige for effektiv retrovirus-sammenstilling og -pakking.

Plat-E-celler ble generert gjennom sekvensiell stabil transfeksjon av pEnv-IRES-puror- og pGag-pol-IRES-bsr-konstrukt, som knytter de virale genene til antibiotikaresistensmarkører via interne ribosominngangssider (IRES). Denne konfigurasjonen garanterer at kun celler som uttrykker de essensielle virale genene også oppnår antibiotikaresistens, noe som muliggjør seleksjon av subkloner med høyt uttrykk. Den resulterende Plat-E-linjen produserer konsekvent retrovirus med titere på opptil 1 × 10⁷ smitteenheter per milliliter i minst fire måneder når den dyrkes under dobbel seleksjon med puromycin og blasticidin. Northern blot-, revers transkriptaseaktivitets- og flowcytometrianalyser bekreftet at Plat-E viser betydelig høyere gag-pol- og env-ekspresjon enn tidligere pakkelinjer som Bosc23 og Phoenix-E.

Plat-Es arkitektur minimerer risikoen for å generere replikasjonskompetente retrovirus (RCR) ved å begrense pakkekonstruksjonene til kun de nødvendige kodende regionene av de virale strukturgenene og separere dem på forskjellige plasmider. Denne utformingen krever minst tre rekombinasjonshendelser for å produsere RCR, noe som dermed forbedrer biosikkerheten. Plat-E har vist seg nyttig i genoverføringsapplikasjoner, inkludert effektiv transduksjon av primære celler som T-celler og mastceller. Ytelsen og den langsiktige stabiliteten gjør den til en pålitelig plattform for produksjon av retrovirale vektorer både i grunnforskning og preklinisk utvikling av genterapi.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring