PLAT-E

Plat-E (Platinum-E) je celična linija za pakiranje retrovirusov, ki je bila ustvarjena na podlagi človeških embrionalnih ledvičnih celic 293T. Razvita je bila z namenom zagotoviti stabilen in učinkovit sistem za prehodno proizvodnjo ekotropnih retrovirusov z visokim titrom. Celična linija je bila konstruirana z uporabo novih konstrukcij za pakiranje, v katerih izražanje virusnih strukturnih genov – gag-pol in env – poganja človeški promotor EF1α, ki je v celicah 293T bistveno močnejši od konvencionalnega promotorja MuLV z dolgim terminalnim ponovitvijo (LTR). Ta zasnova zagotavlja močno transkripcijsko aktivnost in podpira visoko raven proizvodnje virusnih komponent, potrebnih za učinkovito sestavljanje in pakiranje retrovirusov.

Celice Plat-E so bile ustvarjene s sekvenčno stabilno transfekcijo konstruktov pEnv-IRES-puror in pGag-pol-IRES-bsr, ki povezujejo virusne gene z markerji odpornosti proti antibiotikom prek notranjih mest za vstop v ribosom (IRES). Ta konfiguracija zagotavlja, da le celice, ki izražajo bistvene virusne gene, pridobijo tudi odpornost proti antibiotikom, kar omogoča selekcijo podklonov z visoko ekspresijo. Rezultatna linija Plat-E dosledno proizvaja retroviruse s titri do 1 × 10⁷ infekcijskih enot na mililiter vsaj štiri mesece, ko se goji v dvojni selekciji s puromicinom in blasticidinom. Analize Northern blot, aktivnosti reverzne transkriptaze in pretočne citometrije so potrdile, da Plat-E kaže znatno višjo ekspresijo gag-pol in env kot predhodne linije za pakiranje, kot sta Bosc23 in Phoenix-E.

Arhitektura Plat-E zmanjšuje tveganje za nastanek retrovirusa, sposobnega za replikacijo (RCR), tako da omeji pakirne konstrukte le na potrebne kodirne regije virusnih strukturnih genov in jih loči na različne plazmide. Ta zasnova zahteva vsaj tri rekombinacijske dogodke za proizvodnjo RCR, s čimer se poveča biološka varnost. Plat-E se je izkazal za koristnega v aplikacijah za prenos genov, vključno z učinkovitim prenosom v primarne celice, kot so T-celice in mastociti. Zaradi svoje učinkovitosti in dolgoročne stabilnosti je zanesljiva platforma za proizvodnjo retrovirusnih vektorjev tako v temeljnem raziskovanju kot v predkliničnem razvoju genske terapije.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo