HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 est un sous-clone de type cellules caliciformes dérivé de la lignée cellulaire HT29 d’adénocarcinome colorectal humain, obtenu par sélection au méthotrexate (MTX), un processus qui induit une différenciation vers des phénotypes sécrétant du mucus. Parmi les différents sous-clones développés à partir de HT29-MTX, le sous-clone E12 se distingue par sa forte capacité à former des monocouches confluentes dotées de jonctions serrées et d’une couche de mucus continue et nettement épaisse sur la surface apicale. Ce sous-clone présente une proportion plus élevée de cellules caliciformes matures, comme le démontrent la coloration au bleu d’Alcian, la microscopie électronique à transmission (MET) et l’expression des gènes de mucine MUC1 et MUC2. En effet, les niveaux d’ARNm de MUC1 et MUC2 étaient nettement plus élevés dans HT-29-MTX-E12 par rapport aux autres sous-clones et aux cellules HT29 parentales, ce qui correspond à une épaisseur de mucus d’environ 142 ± 51 µm — comparable à l’environnement intestinal in vivo.

Sur le plan fonctionnel, il a été démontré que la lignée HT-29-MTX-E12 reproduit les propriétés de barrière de la couche de mucus intestinal humain, en particulier pour l’évaluation de l’absorption des médicaments lipophiles. La présence d’une barrière muqueuse épaisse réduit de façon significative les coefficients de perméabilité apparents (Papp) de composés lipophiles tels que la testostérone et divers barbituriques, par rapport aux cellules Caco-2 dépourvues de mucus. Par exemple, la testostérone a présenté une réduction de 43 % du Papp dans les cellules HT-29-MTX-E12, ce qui souligne l’impact du mucus sur la diffusion des médicaments. Bien que sa barrière épithéliale soit plus perméable que celle des cellules Caco-2, la lignée HT-29-MTX-E12 conserve sa pertinence physiologique grâce à sa capacité à produire du mucus, ce qui en fait un modèle in vitro précieux pour étudier l’absorption intestinale des médicaments et l’influence du mucus sur la perméabilité.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.