HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 é um subclone semelhante a células caliciformes derivado da linha celular de adenocarcinoma colorrectal humano HT29 através da seleção com metotrexato (MTX), um processo que induz a diferenciação para fenótipos secretores de muco. Entre os vários subclones desenvolvidos a partir de HT29-MTX, o subclone E12 destaca-se pela sua formação robusta de monocamadas confluentes com junções apertadas e uma camada de muco contínua e significativamente espessa na superfície apical. Este subclone apresenta uma maior proporção de células caliciformes maduras, como demonstrado pela coloração com Alcian Blue, pela microscopia eletrónica de transmissão (TEM) e pela expressão dos genes da mucina MUC1 e MUC2. De facto, os níveis de ARNm de MUC1 e MUC2 foram substancialmente mais elevados em HT-29-MTX-E12 em comparação com outros subclones e células HT29 progenitoras, correlacionando-se com uma espessura de muco de aproximadamente 142 ± 51 µm-comparável com o ambiente intestinal in vivo.

Funcionalmente, a HT-29-MTX-E12 demonstrou modelar as propriedades de barreira da camada de muco intestinal humano, particularmente na avaliação da absorção de fármacos lipofílicos. A presença de uma barreira mucosa espessa reduz significativamente os coeficientes de permeabilidade aparente (Papp) de compostos lipofílicos, como a testosterona e vários barbitúricos, quando comparados com células Caco-2 sem muco. Por exemplo, a testosterona apresentou uma redução de 43% no Papp em HT-29-MTX-E12, realçando o impacto do muco na difusão do fármaco. Apesar de ter uma barreira epitelial mais permeável do que as células Caco-2, o HT-29-MTX-E12 mantém a sua relevância fisiológica através da sua capacidade de produção de muco, o que o torna um modelo in vitro valioso para investigar a absorção intestinal de fármacos e a influência do muco na permeabilidade.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia