HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 es un subclon de células caliciformes derivado de la línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano HT29 mediante selección con metotrexato (MTX), un proceso que induce la diferenciación hacia fenotipos secretores de moco. Entre varios subclones desarrollados a partir de HT29-MTX, el subclón E12 destaca por su sólida formación de monocapas confluentes con uniones estrechas y una capa de moco continua y significativamente gruesa en la superficie apical. Este subclon presenta una mayor proporción de células caliciformes maduras, como demuestran la tinción con azul Alcian, la microscopía electrónica de transmisión (TEM) y la expresión de los genes de mucina MUC1 y MUC2. De hecho, los niveles de ARNm de MUC1 y MUC2 eran sustancialmente superiores en HT-29-MTX-E12 en comparación con otros subclones y células HT29 progenitoras, lo que se correlaciona con un grosor del moco de aproximadamente 142 ± 51 µm, comparable al entorno intestinal in vivo.

Desde el punto de vista funcional, se ha demostrado que HT-29-MTX-E12 modela las propiedades de barrera de la capa de mucosa intestinal humana, especialmente en la evaluación de la absorción de fármacos lipofílicos. La presencia de una barrera mucosa gruesa reduce significativamente los coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de compuestos lipofílicos como la testosterona y varios barbitúricos en comparación con las células Caco-2 sin mucosa. Por ejemplo, la testosterona mostró una reducción del 43% del Papp en HT-29-MTX-E12, lo que pone de relieve el impacto del moco en la difusión del fármaco. A pesar de tener una barrera epitelial más permeable que las células Caco-2, HT-29-MTX-E12 mantiene su relevancia fisiológica gracias a su capacidad de producción de moco, lo que la convierte en un valioso modelo in vitro para investigar la absorción intestinal de fármacos y la influencia del moco en la permeabilidad.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía