HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12は、ヒト大腸腺癌細胞株HT29から、粘液分泌表現型への分化を誘導するプロセスであるメトトレキサート（MTX）による選択によって誘導された杯細胞様サブクローンである。HT29-MTXから開発されたいくつかのサブクローンの中で、E12サブクローンは、タイトジャンクションを有するコンフルエントな単層を強固に形成し、アピカル表面に著しく厚く連続した粘液層を形成することから際立っている。このサブクローンは、アルシアンブルー染色、透過型電子顕微鏡（TEM）、およびムチン遺伝子MUC1とMUC2の発現によって示されるように、成熟杯細胞の割合が高いのが特徴である。実際、MUC1とMUC2のmRNAレベルは、HT-29-MTX-E12では、他のサブクローンやHT29の親細胞と比較してかなり高く、約142±51μmの粘液の厚さ-in vivoの腸内環境に匹敵-と相関していた。

機能的には、HT-29-MTX-E12は、特に親油性薬物の吸収を評価する上で、ヒト腸管粘液層のバリア特性をモデル化することが示されている。厚い粘液バリアの存在は、粘液を含まないCaco-2細胞と比較して、テストステロンや各種バルビツール酸塩のような親油性化合物の見かけの透過係数（Papp）を著しく低下させる。例えば、テストステロンはHT-29-MTX-E12でPappが43％減少し、薬物拡散に対する粘液の影響を強調した。HT-29-MTX-E12は、Caco-2細胞よりも上皮バリアがリークしているにもかかわらず、粘液産生能によって生理的妥当性を維持しており、腸管薬物吸収と粘液が透過性に及ぼす影響を調べるための貴重なin vitroモデルとなっている。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。