HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 is een gobletcel-achtige subklon afgeleid van de menselijke colorectale adenocarcinoomcellijn HT29 door selectie met methotrexaat (MTX), een proces dat differentiatie induceert in de richting van slijmsecreterende fenotypen. Van de verschillende subklonen die uit HT29-MTX zijn ontwikkeld, valt de subklon E12 op door zijn robuuste vorming van confluente monolagen met tight junctions en een significant dikke, continue mucuslaag op het apicale oppervlak. Deze subklon heeft een hoger aandeel rijpe gobletcellen, zoals aangetoond door Alcian Blue-kleuring, transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) en expressie van de mucinegenen MUC1 en MUC2. MUC1- en MUC2-mRNA-niveaus waren zelfs aanzienlijk hoger in HT-29-MTX-E12 vergeleken met andere subklonen en ouder HT29-cellen, wat correleert met een slijmdikte van ongeveer 142 ± 51 µm - vergelijkbaar met de in vivo darmomgeving.

Functioneel is aangetoond dat HT-29-MTX-E12 de barrière-eigenschappen van de menselijke darmslijmlaag modelleert, met name bij het evalueren van de absorptie van lipofiele geneesmiddelen. De aanwezigheid van een dikke mucusbarrière vermindert de schijnbare permeabiliteitscoëfficiënten (Papp) van lipofiele verbindingen zoals testosteron en verschillende barbituraten aanzienlijk in vergelijking met mucusvrije Caco-2-cellen. Testosteron liet bijvoorbeeld een 43% lagere Papp zien in HT-29-MTX-E12, wat de invloed van mucus op de verspreiding van geneesmiddelen benadrukt. Ondanks het feit dat HT-29-MTX-E12 een lekkendere epitheliale barrière heeft dan Caco-2 cellen, behoudt het fysiologische relevantie door zijn slijmproducerende capaciteit, waardoor het een waardevol in vitro model is voor het onderzoeken van intestinale medicijnabsorptie en de invloed van slijm op permeabiliteit.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring