HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 on ihmisen paksusuolen adenokarsinooman HT29-solulinjasta metotreksaatilla (MTX) tehdyn valinnan avulla johdettu puslasolujen kaltainen alaklooni, joka indusoi erilaistumisen kohti limaa erittävää fenotyyppiä. HT29-MTX:stä kehitettyjen useiden alakloonien joukosta E12-alaklooni erottuu edukseen, koska se muodostaa vahvasti konfluentteja monokerroksia, joissa on tiukkoja liitoksia ja huomattavan paksu, yhtenäinen limainen kerros apikaalipinnalla. Tässä alakloonissa on suurempi osuus kypsiä kalvosoluja, mikä osoitetaan Alcian Blue -värjäyksellä, transmissioelektronimikroskopialla (TEM) ja musiinigeenien MUC1 ja MUC2 ilmentymisellä. Itse asiassa MUC1- ja MUC2-mRNA-tasot olivat huomattavasti korkeammat HT-29-MTX-E12:ssa kuin muissa alaklooneissa ja HT29:n kantasoluissa, mikä korreloi liman paksuuden kanssa, joka oli noin 142 ± 51 µm - mikä vastaa in vivo-suoliston ympäristöä.

Toiminnallisesti HT-29-MTX-E12:n on osoitettu mallintavan ihmisen suolen limakerroksen esteominaisuuksia erityisesti lipofiilisten lääkkeiden imeytymisen arvioinnissa. Paksun limaesteen läsnäolo vähentää merkittävästi lipofiilisten yhdisteiden, kuten testosteronin ja erilaisten barbituraattien, näennäisiä läpäisykertoimia (Papp) verrattuna limaamattomiin Caco-2-soluihin. Esimerkiksi testosteronin Papp-arvo pieneni 43 prosenttia HT-29-MTX-E12-soluissa, mikä korostaa liman vaikutusta lääkkeen diffuusioon. Vaikka HT-29-MTX-E12-soluilla on Caco-2-soluja tiiviimpi epiteelieste, se säilyttää fysiologisen merkityksensä limantuottokykynsä ansiosta, mikä tekee siitä arvokkaan in vitro -mallin, jolla voidaan tutkia suoliston lääkeaineiden imeytymistä ja liman vaikutusta läpäisevyyteen.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa