HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 عبارة عن سلالة فرعية شبيهة بالخلايا الكأسية مشتقة من خط خلايا سرطان القولون والمستقيم البشري الغدي HT29 من خلال الانتقاء باستخدام الميثوتريكسات (MTX)، وهي عملية تحفز التمايز نحو الأنماط الظاهرية المفرزة للمخاط. من بين العديد من النسخ الفرعية التي تم تطويرها من HT29-MTX، تبرز النسخة الفرعية E12 بسبب تكوينها القوي لطبقات أحادية متماسكة ذات تقاطعات محكمة وطبقة مخاطية سميكة ومتواصلة بشكل ملحوظ على السطح القمي. يتميز هذا الاستنساخ الفرعي بنسبة أعلى من الخلايا الكأسية الناضجة، كما يتضح من تلوين ألسيان بلو، والفحص المجهري الإلكتروني النافذ، والتعبير عن جينات الميوسين MUC1 و MUC2. في الواقع، كانت مستويات MUC1 و MUC2 mRNA أعلى بكثير في خلايا HT-29-MTX-E12 مقارنةً بالخلايا الفرعية الأخرى وخلايا HT29 الأم، وهو ما يرتبط بسماكة مخاطية تبلغ حوالي 142 ± 51 ميكرومتر - وهو ما يمكن مقارنته بالبيئة المعوية في الجسم الحي.

أما من الناحية الوظيفية، فقد ثبت أن HT-29-MTX-E12 يحاكي خصائص الحاجز لطبقة المخاط المعوي البشري، خاصةً في تقييم امتصاص الأدوية المحبة للدهون. إن وجود حاجز مخاطي سميك يقلل بشكل كبير من معاملات النفاذية الظاهرية (Papp) للمركبات المحبة للدهون مثل التستوستيرون ومختلف الباربيتورات عند مقارنتها بخلايا Caco-2 الخالية من المخاط. على سبيل المثال، أظهر هرمون التستوستيرون انخفاضًا بنسبة 43% في معامل النفاذية الظاهرية في HT-29-MTX-E12، مما يسلط الضوء على تأثير المخاط على انتشار الدواء. على الرغم من وجود حاجز طلائي أكثر تسربًا من خلايا Caco-2، إلا أن HT-29-MTX-E12 تحافظ على أهميتها الفسيولوجية من خلال قدرتها على إنتاج المخاط، مما يجعلها نموذجًا قيمًا في المختبر لدراسة امتصاص الدواء المعوي وتأثير المخاط على النفاذية.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان