HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 är en bägarcellsliknande subklon som härrör från den humana kolorektala adenokarcinomcellinjen HT29 genom selektion med metotrexat (MTX), en process som inducerar differentiering mot slemutsöndrande fenotyper. Bland flera subkloner som utvecklats från HT29-MTX utmärker sig subklonen E12 genom sin robusta bildning av sammanflytande monolager med tight junctions och ett betydligt tjockare, kontinuerligt slemlager på den apikala ytan. Denna subklon har en högre andel mogna bägarceller, vilket framgår av Alcian Blue-färgning, transmissionselektronmikroskopi (TEM) och uttryck av mucingenerna MUC1 och MUC2. Faktum är att mRNA-nivåerna för MUC1 och MUC2 var betydligt högre i HT-29-MTX-E12 jämfört med andra subkloner och modercellerna HT29, vilket korrelerade med en slemtjocklek på cirka 142 ± 51 µm - jämförbart med tarmmiljön in vivo.

Funktionellt har HT-29-MTX-E12 visat sig kunna modellera barriäregenskaperna hos det mänskliga tarmslemlagret, särskilt vid utvärdering av absorptionen av lipofila läkemedel. Närvaron av en tjock slembarriär minskar avsevärt de skenbara permeabilitetskoefficienterna (Papp) för lipofila föreningar som testosteron och olika barbiturater jämfört med slemfria Caco-2-celler. Testosteron uppvisade t.ex. en 43% minskning av Papp i HT-29-MTX-E12, vilket belyser slemmets inverkan på läkemedelsdiffusionen. Trots att HT-29-MTX-E12 har en läckande epitelbarriär jämfört med Caco-2-celler, bibehåller den fysiologiska relevansen genom sin slemproducerande kapacitet, vilket gör den till en värdefull in vitro-modell för att undersöka läkemedelsabsorption i tarmen och slemmets inverkan på permeabiliteten.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring