HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 er en begercellelignende subklon avledet fra den humane kolorektale adenokarsinomcellelinjen HT29 gjennom seleksjon med metotreksat (MTX), en prosess som induserer differensiering i retning av slimutskillende fenotyper. Blant flere subkloner som er utviklet fra HT29-MTX, skiller subklonen E12 seg ut ved å danne konfluerende monolag med tette overganger og et betydelig tykt, kontinuerlig slimlag på den apikale overflaten. Denne subklonen har en høyere andel modne begerceller, noe som er påvist ved hjelp av Alcian Blue-farging, transmisjonselektronmikroskopi (TEM) og uttrykk av mucingenene MUC1 og MUC2. Faktisk var mRNA-nivåene av MUC1 og MUC2 vesentlig høyere i HT-29-MTX-E12 sammenlignet med andre subkloner og HT29-stamceller, noe som korrelerer med en slimtykkelse på ca. 142 ± 51 µm - sammenlignbart med tarmmiljøet in vivo.

Funksjonelt har HT-29-MTX-E12 vist seg å være en modell for barriereegenskapene til det humane tarmslimlaget, særlig når det gjelder å evaluere absorpsjonen av lipofile legemidler. Tilstedeværelsen av en tykk slimbarriere reduserer den tilsynelatende permeabilitetskoeffisienten (Papp) for lipofile forbindelser som testosteron og ulike barbiturater betydelig sammenlignet med slimfrie Caco-2-celler. For eksempel viste testosteron en 43 % reduksjon i Papp i HT-29-MTX-E12, noe som understreker slimets innvirkning på diffusjonen av legemidler. Til tross for at HT-29-MTX-E12 har en mer lekk epitelbarriere enn Caco-2-celler, opprettholder den fysiologiske relevansen gjennom sin evne til å produsere slim, noe som gjør den til en verdifull in vitro-modell for å undersøke absorpsjon av legemidler i tarmen og slimets innvirkning på permeabiliteten.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring