HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 è un sottoclone simile a una cellula goblet derivato dalla linea cellulare di adenocarcinoma colorettale umano HT29 mediante selezione con metotrexato (MTX), un processo che induce la differenziazione verso fenotipi secernenti muco. Tra i vari sottocloni sviluppati da HT29-MTX, il sottoclone E12 si distingue per la robusta formazione di monostrati confluenti con giunzioni strette e uno strato di muco continuo e significativamente spesso sulla superficie apicale. Questo sottoclone presenta una maggiore proporzione di cellule goblet mature, come dimostrato dalla colorazione con Alcian Blue, dalla microscopia elettronica a trasmissione (TEM) e dall'espressione dei geni della mucina MUC1 e MUC2. In effetti, i livelli di mRNA di MUC1 e MUC2 erano sostanzialmente più elevati in HT-29-MTX-E12 rispetto ad altri sottocloni e alle cellule HT29 madri, in correlazione con uno spessore del muco di circa 142 ± 51 µm, paragonabile all'ambiente intestinale in vivo.

Dal punto di vista funzionale, è stato dimostrato che HT-29-MTX-E12 è in grado di modellare le proprietà di barriera dello strato di muco intestinale umano, in particolare per valutare l'assorbimento di farmaci lipofili. La presenza di una spessa barriera mucosa riduce significativamente i coefficienti di permeabilità apparente (Papp) di composti lipofili come il testosterone e vari barbiturici rispetto alle cellule Caco-2 prive di muco. Ad esempio, il testosterone ha mostrato una riduzione del 43% della Papp nelle HT-29-MTX-E12, evidenziando l'impatto del muco sulla diffusione dei farmaci. Nonostante la barriera epiteliale sia più debole rispetto alle cellule Caco-2, HT-29-MTX-E12 mantiene una rilevanza fisiologica grazie alla sua capacità di produrre muco, che la rende un valido modello in vitro per studiare l'assorbimento intestinale dei farmaci e l'influenza del muco sulla permeabilità.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia