HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12, mukus salgılayan fenotiplere doğru farklılaşmayı indükleyen bir süreç olan metotreksat (MTX) ile seleksiyon yoluyla insan kolorektal adenokarsinom hücre hattı HT29'dan türetilen goblet hücre benzeri bir alt klondur. HT29-MTX'ten geliştirilen çeşitli alt klonlar arasında E12 alt klonu, sıkı bağlantılar ve apikal yüzeyde önemli ölçüde kalın, sürekli bir mukus tabakası ile birleşmiş monolayerlerin sağlam oluşumu nedeniyle öne çıkmaktadır. Bu alt klon, Alcian Mavisi boyama, transmisyon elektron mikroskobu (TEM) ve müsin genleri MUC1 ve MUC2'nin ekspresyonu ile gösterildiği gibi daha yüksek oranda olgun goblet hücresine sahiptir. Aslında, MUC1 ve MUC2 mRNA seviyeleri HT-29-MTX-E12'de diğer alt klonlara ve ana HT29 hücrelerine kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti ve in vivo bağırsak ortamıyla karşılaştırılabilir şekilde yaklaşık 142 ± 51 µm'lik bir mukus kalınlığıyla ilişkiliydi.

İşlevsel olarak HT-29-MTX-E12'nin, özellikle lipofilik ilaçların emiliminin değerlendirilmesinde, insan bağırsak mukus tabakasının bariyer özelliklerini modellediği gösterilmiştir. Kalın bir mukus bariyerinin varlığı, mukus içermeyen Caco-2 hücrelerine kıyasla testosteron ve çeşitli barbitüratlar gibi lipofilik bileşiklerin görünür geçirgenlik katsayılarını (Papp) önemli ölçüde azaltır. Örneğin, testosteron HT-29-MTX-E12'de Papp'de %43'lük bir azalma göstererek mukusun ilaç difüzyonu üzerindeki etkisini vurgulamıştır. HT-29-MTX-E12, Caco-2 hücrelerinden daha sızdıran bir epitel bariyerine sahip olmasına rağmen, mukus üretme kapasitesi sayesinde fizyolojik uygunluğunu korumakta ve bu da onu bağırsak ilaç emilimini ve mukusun geçirgenlik üzerindeki etkisini araştırmak için değerli bir in vitro model haline getirmektedir.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın