HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 je subklón podobný pohárikovým bunkám odvodený z bunkovej línie ľudského kolorektálneho adenokarcinómu HT29 selekciou pomocou metotrexátu (MTX), čo je proces, ktorý indukuje diferenciáciu smerom k fenotypom vylučujúcim hlien. Spomedzi niekoľkých subklonov vyvinutých z HT29-MTX vyniká subklón E12 svojou robustnou tvorbou splývajúcich monovrstiev s tesnými spojmi a výrazne hrubou, súvislou vrstvou hlienu na apikálnom povrchu. Tento subklón sa vyznačuje vyšším podielom zrelých pohárikových buniek, čo sa preukázalo farbením alciánovou modrou, transmisnou elektrónovou mikroskopiou (TEM) a expresiou mucínových génov MUC1 a MUC2. Hladiny mRNA MUC1 a MUC2 boli v skutočnosti podstatne vyššie v HT-29-MTX-E12 v porovnaní s ostatnými subklonmi a materskými bunkami HT29, čo korelovalo s hrúbkou hlienu približne 142 ± 51 µm - porovnateľnou s črevným prostredím in vivo.

Z funkčného hľadiska sa ukázalo, že HT-29-MTX-E12 modeluje bariérové vlastnosti vrstvy ľudského črevného hlienu, najmä pri hodnotení absorpcie lipofilných liečiv. Prítomnosť hrubej hlienovej bariéry významne znižuje koeficienty zdanlivej permeability (Papp) lipofilných zlúčenín, ako sú testosterón a rôzne barbituráty, v porovnaní s bunkami Caco-2 bez hlienu. Napríklad testosterón vykazoval 43 % zníženie Papp v HT-29-MTX-E12, čo poukazuje na vplyv hlienu na difúziu liečiva. Napriek tomu, že HT-29-MTX-E12 má nepriepustnejšiu epitelovú bariéru ako bunky Caco-2, zachováva si fyziologický význam vďaka svojej schopnosti produkovať hlien, čo z nej robí cenný in vitro model na skúmanie absorpcie liečiv v čreve a vplyvu hlienu na permeabilitu.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke