HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 - це келихоподібний субклон, отриманий з клітинної лінії колоректальної аденокарциноми людини HT29 шляхом селекції метотрексатом (MTX) - процесу, який індукує диференціацію в бік фенотипів, що секретують слиз. Серед кількох субклонів, отриманих з HT29-MTX, субклон E12 виділяється завдяки потужному утворенню моношарів, що зливаються, з щільними з'єднаннями і значно товстим, безперервним шаром слизу на апікальній поверхні. Цей субклон характеризується більшою часткою зрілих келихоподібних клітин, що демонструється забарвленням альціановим синім, трансмісійною електронною мікроскопією (ТЕМ) та експресією генів муцинів MUC1 і MUC2. Насправді, рівні мРНК MUC1 і MUC2 були значно вищими в HT-29-MTX-E12 порівняно з іншими субклонами і материнськими клітинами HT29, що корелювало з товщиною слизу приблизно 142 ± 51 мкм - порівняно з кишковим середовищем in vivo.

Показано, що функціонально HT-29-MTX-E12 моделюють бар'єрні властивості слизового шару кишечника людини, зокрема, при оцінці всмоктування ліпофільних препаратів. Наявність товстого слизового бар'єру значно знижує коефіцієнти видимої проникності (Papp) ліпофільних сполук, таких як тестостерон і різні барбітурати, порівняно з клітинами Caco-2 без слизу. Наприклад, тестостерон показав зниження Papp на 43% в HT-29-MTX-E12, що підкреслює вплив слизу на дифузію ліків. Незважаючи на те, що епітеліальний бар'єр HT-29-MTX-E12 є більш негерметичним, ніж у клітин Caco-2, він зберігає фізіологічну релевантність завдяки здатності продукувати слиз, що робить його цінною моделлю in vitro для дослідження всмоктування ліків у кишечнику та впливу слизу на проникність.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>