HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 ist ein becherzellenähnlicher Subklon, der aus der humanen kolorektalen Adenokarzinom-Zelllinie HT29 durch Selektion mit Methotrexat (MTX) gewonnen wurde, einem Verfahren, das eine Differenzierung in Richtung schleimabsondernder Phänotypen bewirkt. Unter mehreren Subklonen, die aus HT29-MTX entwickelt wurden, sticht der Subklon E12 durch seine robuste Bildung von konfluenten Monolayern mit Tight Junctions und einer signifikant dicken, kontinuierlichen Schleimschicht an der apikalen Oberfläche hervor. Dieser Subklon weist einen höheren Anteil an reifen Becherzellen auf, wie die Alcianblau-Färbung, die Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) und die Expression der Mucin-Gene MUC1 und MUC2 zeigen. Tatsächlich waren die MUC1- und MUC2-mRNA-Konzentrationen in HT-29-MTX-E12 im Vergleich zu anderen Subklonen und Mutterzellen von HT29 wesentlich höher, was mit einer Schleimdicke von etwa 142 ± 51 µm korreliert - vergleichbar mit der Darmumgebung in vivo.

Es hat sich gezeigt, dass HT-29-MTX-E12 die Barriereeigenschaften der menschlichen Darmschleimhaut nachbilden kann, insbesondere bei der Bewertung der Absorption lipophiler Arzneimittel. Das Vorhandensein einer dicken Schleimbarriere reduziert die scheinbaren Permeabilitätskoeffizienten (Papp) von lipophilen Verbindungen wie Testosteron und verschiedenen Barbituraten im Vergleich zu schleimfreien Caco-2-Zellen erheblich. So zeigte Testosteron in HT-29-MTX-E12 eine 43%ige Verringerung des Papp-Wertes, was den Einfluss von Schleim auf die Medikamentendiffusion verdeutlicht. Obwohl HT-29-MTX-E12 eine undichtere Epithelbarriere als Caco-2-Zellen hat, ist sie aufgrund ihrer Fähigkeit, Schleim zu produzieren, physiologisch relevant und damit ein wertvolles In-vitro-Modell für die Untersuchung der intestinalen Arzneimittelabsorption und des Einflusses von Schleim auf die Permeabilität.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung