HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 je subklon podobný pohárkovým buňkám odvozený z buněčné linie lidského kolorektálního adenokarcinomu HT29 pomocí selekce metotrexátem (MTX), což je proces, který indukuje diferenciaci směrem k fenotypům vylučujícím hlen. Mezi několika subklony vyvinutými z HT29-MTX vyniká subklon E12 díky robustní tvorbě splývajících monovrstev s těsnými spoji a výrazně silnou, souvislou vrstvou hlenu na apikálním povrchu. Tento subklon se vyznačuje vyšším podílem zralých pohárkových buněk, jak prokázalo barvení alciánovou modří, transmisní elektronová mikroskopie (TEM) a exprese mucinových genů MUC1 a MUC2. Hladiny mRNA MUC1 a MUC2 byly u HT-29-MTX-E12 ve srovnání s ostatními subklony a mateřskými buňkami HT29 podstatně vyšší, což koreluje s tloušťkou hlenu přibližně 142 ± 51 µm - srovnatelnou se střevním prostředím in vivo.

Z funkčního hlediska se ukázalo, že HT-29-MTX-E12 modeluje bariérové vlastnosti lidské střevní hlenové vrstvy, zejména při hodnocení absorpce lipofilních léčiv. Přítomnost silné hlenové bariéry významně snižuje koeficienty zdánlivé propustnosti (Papp) lipofilních sloučenin, jako je testosteron a různé barbituráty, ve srovnání s buňkami Caco-2 bez hlenu. Například testosteron vykazoval 43% snížení Papp v HT-29-MTX-E12, což zdůrazňuje vliv hlenu na difúzi léčiv. Přestože mají buňky HT-29-MTX-E12 netěsnější epiteliální bariéru než buňky Caco-2, zachovávají si díky své schopnosti produkovat hlen fyziologický význam, což z nich činí cenný in vitro model pro zkoumání střevní absorpce léčiv a vlivu hlenu na permeabilitu.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení