HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 to podklon komórek kubkowych uzyskany z linii komórkowej HT29 ludzkiego gruczolakoraka jelita grubego poprzez selekcję metotreksatem (MTX), proces, który indukuje różnicowanie w kierunku fenotypów wydzielających śluz. Spośród kilku podklonów opracowanych z HT29-MTX, podklon E12 wyróżnia się silnym tworzeniem zwartych monowarstw ze ścisłymi połączeniami i znacznie grubą, ciągłą warstwą śluzu na powierzchni wierzchołkowej. Podklon ten charakteryzuje się wyższym odsetkiem dojrzałych komórek kubkowych, co wykazano za pomocą barwienia błękitem Alciana, transmisyjnej mikroskopii elektronowej (TEM) oraz ekspresji genów mucyn MUC1 i MUC2. W rzeczywistości poziomy mRNA MUC1 i MUC2 były znacznie wyższe w HT-29-MTX-E12 w porównaniu z innymi podklonami i macierzystymi komórkami HT29, co korelowało z grubością śluzu wynoszącą około 142 ± 51 µm - porównywalną do środowiska jelitowego in vivo.

Wykazano, że funkcjonalnie HT-29-MTX-E12 modeluje właściwości barierowe warstwy śluzu ludzkiego jelita, szczególnie w ocenie wchłaniania leków lipofilowych. Obecność grubej bariery śluzowej znacznie zmniejsza pozorne współczynniki przepuszczalności (Papp) związków lipofilowych, takich jak testosteron i różne barbiturany, w porównaniu z pozbawionymi śluzu komórkami Caco-2. Na przykład testosteron wykazał 43% redukcję Papp w HT-29-MTX-E12, podkreślając wpływ śluzu na dyfuzję leku. Pomimo bardziej nieszczelnej bariery nabłonkowej niż komórki Caco-2, HT-29-MTX-E12 zachowuje znaczenie fizjologiczne dzięki zdolności do produkcji śluzu, co czyni go cennym modelem in vitro do badania wchłaniania leków w jelitach i wpływu śluzu na przepuszczalność.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym