HT-29-MTX-E12

HT-29-MTX-E12 เป็นเซลล์ย่อยที่มีลักษณะคล้ายเซลล์โกเบล็ตซึ่งได้มาจากสายพันธุ์เซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักของมนุษย์ HT29 ผ่านการคัดเลือกด้วยยาเมโธเทรกเซต (MTX) ซึ่งเป็นกระบวนการที่กระตุ้นให้เกิดการเปลี่ยนแปลงไปสู่ลักษณะการแสดงออกของการหลั่งเมือกในบรรดาซับโคลนหลายตัวที่พัฒนาจาก HT29-MTX ซับโคลน E12 โดดเด่นเนื่องจากการสร้างชั้นเดียวที่หนาแน่นอย่างสมบูรณ์พร้อมด้วยรอยต่อที่แน่นหนาและชั้นเมือกที่หนาและต่อเนื่องอย่างมากบนพื้นผิวด้านบน ซับโคลนนี้มีสัดส่วนของเซลล์โกเบล็ตที่โตเต็มที่สูงกว่า ซึ่งแสดงให้เห็นโดยการย้อมสีด้วย Alcian Blue การถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่งผ่าน (TEM) และการแสดงออกของยีนมิวซิน MUC1 และ MUC2ในความเป็นจริง ระดับ mRNA ของ MUC1 และ MUC2 ใน HT-29-MTX-E12 สูงกว่าในเซลล์ย่อยอื่นๆ และเซลล์ต้นกำเนิด HT29 อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งสอดคล้องกับความหนาของเมือกประมาณ 142 ± 51 µm ซึ่งเทียบได้กับสภาพแวดล้อมในลำไส้ในร่างกาย

ในเชิงหน้าที่ HT-29-MTX-E12 ได้แสดงให้เห็นว่าสามารถจำลองคุณสมบัติของชั้นเมือกในลำไส้ของมนุษย์ได้ โดยเฉพาะในการประเมินการดูดซึมของยาที่ชอบไขมัน การมีอยู่ของชั้นเมือกหนาช่วยลดค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่านที่ปรากฏ (Papp) ของสารประกอบที่ชอบไขมัน เช่น เทสโทสเตอโรน และบาร์บิทูเรตต่างๆ อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ Caco-2 ที่ไม่มีเมือกตัวอย่างเช่น เทสโทสเตอโรนแสดงการลดลงของ Papp ถึง 43% ใน HT-29-MTX-E12 ซึ่งเน้นย้ำถึงผลกระทบของเมือกต่อการแพร่กระจายของยา แม้ว่าจะมีอุปสรรคของเยื่อบุผิวที่รั่วมากกว่าเซลล์ Caco-2 แต่ HT-29-MTX-E12 ยังคงมีความเกี่ยวข้องทางสรีรวิทยาผ่านความสามารถในการผลิตเมือก ทำให้เป็นแบบจำลองในหลอดทดลองที่มีคุณค่าสำหรับการศึกษาการดูดซึมยาในลำไส้และอิทธิพลของเมือกต่อการซึมผ่าน

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.