Huh-7.5.1

A linhagem celular Huh-7.5.1 é um subclone derivado das células de hepatoma Huh-7, conhecida por sua maior permissividade à replicação do vírus da hepatite C (HCV). Desenvolvidas como uma versão aprimorada da linhagem celular Huh-7.5, as células Huh-7.5.1 foram estabelecidas a partir de uma linhagem celular de replicon do HCV curada e apresentam maior suscetibilidade à infecção pelo HCV em comparação com suas antecessoras. Elas são capazes de sustentar ciclos robustos de replicação do HCV, o que as torna um modelo preferido para o estudo dos ciclos de vida do HCV, incluindo a entrada viral, a replicação do RNA e a produção de partículas infecciosas.

O uso das células Huh-7.5.1 tem sido particularmente valioso na pesquisa do HCV devido à sua maior eficiência na replicação do RNA viral e na produção de vírus infecciosos. Essa linhagem celular apresenta altos títulos virais, atingindo tipicamente de 10⁴ a 10⁵ unidades infecciosas por mililitro nos sobrenadantes de cultura durante infecções pela cepa HCV-JFH1. Essa característica permite a análise detalhada da patogênese viral e das respostas antivirais in vitro. É importante ressaltar que as células Huh-7.5.1 são empregadas na triagem de compostos antivirais que têm como alvo o HCV, auxiliando no desenvolvimento de tratamentos contra o HCV e fornecendo insights sobre os mecanismos de resistência.

Além disso, as células têm sido utilizadas em estudos mais amplos envolvendo interações virais com a maquinaria celular do hospedeiro, o metabolismo lipídico e alvos terapêuticos relacionados. Por exemplo, a inibição de vias celulares, como a via SREBP mediada pela protease SKI-1/S1P, demonstrou ter impacto na replicação do vírus nas células Huh-7.5.1, destacando sua utilidade para pesquisas sobre estratégias antivirais direcionadas ao hospedeiro.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.