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KHM-5M
Gewebe
Schilddrüse
Krankheit
Anaplastisches Schilddrüsenkarzinom
Metastasenherd
Pleuraerguss
Synonyme
KHM/5M, KHM5M

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KHM-5M

Cell line · Artikelnummer 305148

The KHM-5M cell line is an important model derived from a patient with undifferentiated thyroid carcinoma complicated by neutrophilia and malignant pleuri...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die KHM-5M-Zelllinie ist ein wichtiges Modell, das von einem Patienten mit undifferenziertem Schilddrüsenkarzinom stammt, das durch Neutrophilie und maligne Pleuritis kompliziert ist. Diese Zelllinie zeichnet sich durch eine signifikante Produktion von neutrophilen chemotaktischen Faktoren aus, insbesondere von humanem Interleukin 8 (IL-8) und Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor (GM-CSF). Diese Faktoren sind entscheidend für die Rekrutierung und Aktivierung von Neutrophilen, die eine zentrale Rolle bei der Immunantwort und bei Entzündungen spielen. Es wurde gezeigt, dass die KHM-5M-Zellen eine extreme chemotaktische Aktivität besitzen, eine Eigenschaft, die durch In-vitro-Experimente unter Verwendung von konditionierten Medien aus den Zellen und der modifizierten Boyden-Kammer-Technik nachgewiesen wurde.

Außerdem wurden KHM-5M-Zellen in Nacktratten transplantiert, wo die Infiltration von Neutrophilen in und um das transplantierte Tumorgewebe beobachtet wurde. Dieser Befund unterstreicht die Bedeutung von KHM-5M als Modell für die Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen Tumorzellen und der immunen Mikroumgebung, insbesondere in Bezug auf die Rekrutierung und Funktion von Neutrophilen. Die Zelllinie dient auch als wertvolles Instrument für die Untersuchung der molekularen Mechanismen, die der Zytokinproduktion bei Krebs und der anschließenden Veränderung der pathologischen Merkmale zugrunde liegen. Durch DNA-Klonierungstechniken wurden die chemotaktischen Aktivitäten, die IL-8 und GM-CSF zugeschrieben werden, bestätigt, was die KHM-5M-Zelllinie als wichtige Ressource für die Erforschung von Zytokin-getriebenen Tumor-Immun-Interaktionen festigt.

Gewebe
Schilddrüse
Krankheit
Anaplastisches Schilddrüsenkarzinom
Metastasenherd
Pleuraerguss
Synonyme
  • KHM/5M
  • KHM5M

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblasten
Verdopplungszeit
27 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
KHM-5M (Cytion-Katalognummer 305148)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_2975

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
65 Jahre